实验1 叶绿体的分离与荧光观察

@杨慧慧中国海洋大学实验报告 2019 年 3 月 30 日姓名杨慧慧学号 17050031803 系年级海洋生命学院 2017 专业生物技术科目细胞生物学实验上课时间周六 12 节 题目实验一叶绿体的分离和荧光观察一、实验目的1. 通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。二、实验原理1.将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。2.叶绿体的分离应在等渗溶液中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。3.因为叶绿体有自发荧光，因此用荧光显微镜进行观察。三、实验用品1.材料：新鲜菠菜。2.试剂：0.35mol/L 氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridineorange)。3.器材：(1) 主要设备:普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。(2) 小型器材:烧杯,量筒,滴管,刻度离心管,纱布，无荧光载片和盖片。四、实验步骤与方法一、叶绿体的分离与观察1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称 30g 于 150ml0.35mol/LNaCl 溶液中，装入组织捣碎机。2. 低速匀浆 3~5min。3. 将匀浆用 6 层纱布过滤于 500ml 烧杯中。4. 每组取滤液 4ml，1000r/min 下离心 2min，弃去沉淀。5. 将上清液在 3000r/min 下离心 5min，弃去上清液，沉淀即含叶绿体(混有部分细胞核)。6. 将沉淀用 0.35mol/LNaCl 溶液悬浮。7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。(1) 在普通光镜下观察。(2) 在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。(3) 在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴 0.01%吖啶橙荧光染料,加盖片后即可在荧光显微镜下观察。二、菠菜叶手撕片观察轻轻撕取新鲜嫩菠菜叶的表皮，展平置于载玻片上，滴加 1~2 滴 0.35mol/LNaCl 溶液，加盖片后置显微镜下观察。(1) 在普通光镜下观察。(2) 在荧光显微镜下观察其直接荧光。(3) 观察其间接荧光：向所制手撕片上滴加 1~2 滴 0.01%吖啶橙染液，染色 1min，洗去余@杨慧慧液,加盖片后即可在荧光显微镜下观察其间接荧光@杨慧慧五、实验结果（+照片、手绘图）1•画出在显微镜下的叶绿体和细胞组分形态（注明形态的放大倍数）图 1 普通光学显微镜下观察到的叶绿体（10*40）图 2：普通光学显微镜下的叶绿体（手绘图）① 基粒②基质普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型，在高倍镜下可看到叶绿体内部...