基因工程和蛋白质工程考纲要求:1、基因工程的诞生 Ⅰ 2、基因工程的原理及技术Ⅱ 3、基因工程的应用Ⅱ4、蛋白质工程Ⅰ一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,通过体外 DNA 重组和转基因技术,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品
基因工程是在 水平上进行设计和施工的,又叫做 DNA 重组技术
(一)基因工程的基本工具1
“分子手术刀”—— (1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的
(2)功能:能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 ,因此具有专一性
(3)结果:经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式: 2
“分子缝合针”—— (1)功能:缝合 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键
DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端,形成磷酸二酯键
“分子运输车”—— (1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存
②具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA 片段插入
③具有标记基因,供重组 DNA 的鉴定和选择
(2)最常用的载体是 ,它是一种有自我复制能力的双链环状 DNA 分子
(3)其它载体: 噬菌体、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1
目的基因是指: 编码蛋白质的基因
原核基因采取直接分离法获得,真核基因是人工合成法
人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_
限制酶 运载体直接分离法:供体细胞中的 DNA→ DNA 片段→ 受体细胞→DNA 片段扩增反转录法:逆转录 合成 mRNA → 单链 DNA → 双链 DNA化学合成法:根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的 mRNA 序列,推测出结构基因的核苷酸序列,再通过化学方法,合成目的基因
第二步:重组载体的