【实验九】DNA 的粗提取与鉴定一 教学目的1.初步掌握 DNA 的粗提取和鉴定的方法。2.观察提取出来的 DNA 物质。二 教学建议在本实验的教学中，教师应注意以下几点。1.实验材料必须准备充足。本实 验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2 个学生)需用 5 mL 鸡血细胞液,则每班(50 人)至少需要 130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为 13,这样每班至少需要 390 mL 鸡血细胞液。宰杀 1 只中等大小的活鸡,一般可得 0 mL 左右的鲜血,因此,1 个班实验需要买 4 只活鸡。如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的 DNA,容易 被玻璃容器吸附,由于细胞内 DNA 的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的 DNA 就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中 DNA 的损失。3.获取较纯净的 DNA 的关键步骤。(1)充分搅拌鸡血细胞液 DNA 存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出 DNA。(2)沉淀 DNA 时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为 95%的酒精,并在冰箱(至少5S 以下)中至少存放 24 h。(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤 3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤 3、5 时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的 DNA 分子。进行步骤 7 时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动 510 min。三 参考资料实验原理的补充介绍1.DNA 的释放 DNA 位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。为 了使 DNA 从细胞核中释放出来,实验中采用了向 鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞 膜和核膜的破裂),于是释放出 DNA,当然也有 RNA。但是,释放出来的大量 DNA 和 RNA 往往与蛋白质结合在一起。2.将 DNA 与蛋白质分离 根据二者的特性,即在浓度较高的氯化钠溶液(物质的量浓度为 2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游离出 DNA。而 DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na+与带负电的 DNA 结合成 DNA 钠盐。这时 DNA ...
