高二生物教学案（52）姓名 班级 学号 课题血红蛋白的提取和分离 主备：毛银兰 审校：仲娟预 习 完 成学习目标：本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。学习重点和难点：学习重点：凝胶色谱法的原理和方法。学习难点：色谱柱制作、填料的处理、色谱柱的装填和样品的加入与处理。预习内容凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的制作 ① 柱底部的制作 a．选择合适的橡皮塞，中间打孔。 b．在橡皮塞顶部切出锅底状_____________，在 0.5 mL 的___________头部切下___________长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。 c．剪尼龙网小圆片覆盖在___________。用___________的尼龙纱将橡皮塞___________包好，插到玻璃管一端。 d．色谱柱下端用移液管头部作___________，连接一细的___________，并用___________控制尼龙管的___________与___________，另一端放入收集___________的收集器内。 ② 柱顶部的制作：插入安装了玻璃管的橡皮塞。 (2)凝胶色谱柱的装填 ① 填充材料：交联葡聚糖凝胶。 ② 方法：凝胶用___________充分溶胀后，配成___________，在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下，一次性缓慢倒入___________。 装填完后，立即连接___________，在___________高的操作压下，用 300 mL 的 20 mol·L的磷酸缓冲液充分___________平衡凝胶 12 h，使凝胶装填___________。 (3)样品的加入和洗脱 ① 加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的__________下降到与__________平齐，关闭出口。 ② 加样：用___________将 1 mL___________的样品加到色谱柱的___________。 ③ 加样后：打开___________，使样品渗入凝胶床内，等完全进入后，关闭下端出口。小心加入缓冲液到___________，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每___________收集一管，连接收集。 Ⅲ．SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳判断___________的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。巩固练习1．初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为 ( )A．H2 CO3一 NaHCO3缓冲液 B．NH4OH—NH4Cl 缓冲液C．CH3 COOH—CH3 COONa 缓冲液 D．H3PO4缓冲液2．蛋白质提取和分离分为哪几步 ( )A．样品处理、凝胶色谱操...
