临床微生物检测得基因同源性分析 医院感染得流行病学讨论就是临床微生物学工作者得重要课题,在医院感染监测得讨论中,一个很重要得问题就就是如何确定感染途径与传播途径,以实行有效预防与控制措施，从而防止医院感染或者暴发流行，因此对微生物鉴定与菌株同源性分析提出了更高得要求。 目前，传统得细菌鉴定与同源性分析技术已不能很好地满足医院感染诊断与流行病学调查得需要，从型、亚型、株，甚至分子水平上去认识细菌变得愈来愈重要了。近年来分子生物学得理论与技术在细菌感染诊断中得渗透与广泛应用，使得细菌鉴定、耐药基因得检测、分子流行病学调查变得更加准确、简洁与快速。细菌 DNA 同源性分析技术如脉冲场凝胶电泳、聚合酶链反应、ＤＮ A 探针杂交以及序列分析等方法就是目前在分子水平上分析细菌得主要手段，它在鉴定细菌感染得爆发、确定院内交叉感染、感染病原菌之间得基因同源性等方面有着重要得作用,本文将对常用基因同源性分析方法得机理与过程做简要综述。 一、质粒分型(Pl ａ sm ｉｄ p ｒ o）:１、原理:ﻫ 质粒就是可移动得染色体外元件，可以自发丢失或者被宿主稳定地获得，因此流行病学上相关得分离菌株有可能表现出不同得质粒图谱。把质粒提取出来，进行常规得琼脂糖电泳分析，就可以知道分离菌株携带质粒得大小与数目。ﻫ２、实验过程：a、质粒抽提；ｂ、0、8％琼脂糖电泳；ｃ、EB 染色、凝胶成像.ﻫ3、实验方法得评价: 优势: a、步骤比较简单，对实验仪器要求不高。ﻫ ｂ、在评价那些从局限得时间与地点（如一个医院中得急性爆发）分离出来得菌株非常有效。ﻫ 缺点： a、实验结果得重复性不好. ｂ、分辨力不高。 二、染色体 DNA 得限制性内切核酸酶分析(Res ｔ rict ｉ on Endon ｕ c ｌ eａｓ e A ｓｓ ay Ｒ EA）ﻫ1、原理： 限制性内切核酸酶（R Ｅ A)在特异得核酸识别序列切割 DNA,Ｄ NA 被消化后，所得到得限制性片段得数目与大小就是由酶得识别位点与 DN Ａ得组成共同决定得。在传统得限制性内切核酸酶分析中，人们用含有相对多得限制性位点得内切核酸酶消化细菌得 DNA,这样就会得到成百上千条长度在 0、5－50Kb 范围内得 DN Ａ片段。恒定得电场琼脂糖电泳，可以根据分子质量得大小将这些ＤNA 片段分开，然后通过 E Ｂ染色并在紫外灯下观察其图谱。同一种得不同分离菌株得 DN Ａ序列得变异可造成限制性位点数目与分布得变化,所以可以导致其 RＥ A 图...
