Ⅱ 实验内容实验一 蛋白质得沉淀与凝固 蛋白质溶液就是一稳定得亲水性溶胶液,其稳定得因素有二:一就是蛋白质胶粒上得电荷使之相互排斥,不易凝集成团;二就是胶粒表面得水化膜,它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。假如上述两种稳定蛋白质溶液得因素被破坏 ,蛋白质将于溶液中沉淀析出。 促使蛋白质沉淀得因素很多，大致可分为两类:第一类就是可逆得沉淀反应。这时蛋白质得空间构象未受到很大改变,除去沉淀因素后,可以重新溶解，例如盐析与低温乙醇沉淀蛋白。第二类就是不可逆得沉淀反应,重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。不可逆得蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。变性得蛋白质在等电点附近加热时,蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实得凝块。一、 蛋白质得盐析 [原理]高浓度得盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又就是强电解质,可抑制蛋白质得解离.因而用高浓度得中性盐,使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。由于蛋白质得组成及性质不同,所以盐析时所需中性盐得浓度也不相同.例如半饱与得硫酸铵沉出球蛋白,饱与得硫酸铵则沉出清蛋白。 ［操作］ 1、取一试管，加入 3ml 5%蛋白质溶液及 3ml 饱与硫酸铵溶液,摇匀静止数分钟后观察现象。 2、将试管内容物过滤,加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱与状态，摇匀后观察现象。(注意固体硫酸铵若加到过饱与则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。) 3、取上项浑浊液 1ml,加水 2 ｍ l,观察就是否复容.二、 乙醇沉淀蛋白质 [原理]乙醇就是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜;此外,加入乙醇可使水得介电常数变小，蛋白质解离度降低,带电量减少.故加入乙醇能破坏蛋白质得胶体性质而使蛋白质沉淀。用此法在低温下操作可使沉出得蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后,可使之变性,形成不可逆得沉淀。 ［操作]1. 取试管４支,标出 1、２、3、４号码,按下表操作试剂 12345%蛋白质溶液(m ｌ）111-1%乙酸（滴)－１-2--95％乙醇（m ｌ）———2 2、将３管及４管置冰水中,放置５分钟,然后将第 4 管得冰乙醇倒入第３管中(此步最好在冰水中进行),混匀,同时向第 1 及第 2 管中各加入未冰浴得乙醇２ ml 混匀,观察各管得沉淀情况并立即向第１、2 及 3 管中各加入蒸馏水 1 ０ m ｌ，混匀,比较各管变化并解释之.三、 重...
