实验四 血涂片的制备与染色

实验四 血涂片得制备与染色【目得】 掌握血涂片得制备与染色方法(preparation and staining of thin blood films)。【原理】 将一小滴血液均匀涂在玻片上 ,呈单层紧密分布,制成薄血片。用含天青 B 与伊红得Romannowsky 类染料进行染色。细胞中得碱性物质如 RBC 中得血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中得嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色;细胞中得酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中得嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色;中性粒细胞得中性颗粒呈等电状态与伊红与美蓝均可结合,染成淡紫红色。【器材】1.载玻片 使用前,必须认真清洗,并用乙醇或软布清洁。2.推片 选择边缘光滑得载玻片,在两角分别作斜线标记,然后用玻璃切割刀裁去两角,制成约 15mm 宽度得推片。3.吸耳球。4.显微镜。5.酒精灯或 Bunsen 灯。6.采血针。7.注射器与针头。【试剂】1.瑞氏(Wright)染液(1)Ⅰ 液:包含瑞氏染料 1、0g、纯甲醇(AR 级以上)600ml、甘油 15ml。将全部染料放入清洁干燥得乳钵中,先加少量甲醇慢慢地研磨(至少 30min),以使染料充分溶解,再加一些甲醇混匀,然后将溶解得部分倒入干净得棕色瓶内,乳钵内剩余得未溶解得染料,再加入少许甲醇细研,如此多次研磨,直至染料全部溶解,甲醇用完为止。再加 15ml 甘油密闭保存。(2)Ⅱ 液 : 磷 酸 盐 缓 冲 液 (pH6 、 4 ～ 6 、 8), 包 含 磷 酸 二 氢 钾 (KH2PO4)0 、 3g 、 磷 酸 氢 二 钠(Na2HPO4)0、2g、蒸馏水加至 1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正 pH,塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新奇蒸馏水代替。2.吉姆萨染液 包含吉姆萨染料 0、75g、甘油 35ml、甲醇 65ml。将吉姆萨染料、甘油与甲醇放入含玻璃珠得容器内,每天混匀 3 次,连续 4 天,最后过滤备用。3.瑞-吉复合染液(1)I 液:包含瑞氏染料 1g、吉姆萨染料 0、3g、甲醇 500ml、中性甘油 10ml。将瑞氏染料与吉姆萨染料置干净研钵中,加少量甲醇,研磨片刻,再吸出上液。如此连续几次,共用甲醇 500ml。收集于棕色玻璃瓶中,每天早、晚各摇 3min,共 5d,以后存放 1 周即能使用。(2)Ⅱ 液:即磷酸盐缓冲液(pH6、4～6、8)。包含无水磷酸二氢钾 6、64g、无水磷酸氢二钠 2、56g,加少量蒸馏水溶解,用磷酸盐调整 pH,加水至 1000ml。【标本】 EDTA 抗凝静脉血或末梢血。【操作】1.采血 (1)静脉采血法:用 EDTA·K2抗凝 1～2h 内得标本,使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm...