第 30 讲 基因工程最新考纲近三年考情1.基因工程的诞生(Ⅰ)2.基因工程的原理及技术(含 PCR 技术)(Ⅱ)3.基因工程的应用(Ⅱ)4.蛋白质工程(Ⅰ)5.实验：DNA 的粗提取与鉴定2018·全国卷Ⅰ(38)、2018·全国卷Ⅱ(38)、2017·全国卷Ⅰ(37)、2017·全国卷Ⅱ(37)、2017·全国卷Ⅲ(37)、2016·全国卷Ⅰ(40)、2016·全国卷Ⅲ(40)考点一 基因工程的基本工具及操作过程1.基因工程的基本工具(1)限制酶(2)DNA 连接酶① 作用：将限制酶切割下来的 DNA 片段拼接成 DNA 分子 。② 类型常用类型E·coli DNA 连接酶T4 DNA 连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能只“缝合”黏性末端“缝合”黏性末端和平末端结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键(3)载体② 其他载体：λ 噬菌体衍生物、动植物病毒等。③ 载体的作用：携带外源 DNA 片段进入受体细胞。2.基因工程的基本操作程序1.(2018·全国卷Ⅰ，38)回答下列问题：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了___________________________________________________________________________________________________________________________________________( 答 出 两 点即可)。(2)体外重组的质粒可通过 Ca2＋参与的________方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体 DNA 通常需与________组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体 DNA 导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是________。(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用________的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加________的抑制剂。解析 (1)两位科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中并进行了表达，因此，该研究可以证明：质粒可以作为载体，真核细胞的基因在原核细胞中也可以表达(不同生物共用一套密码子)、体外重组的质粒可以进入受体细胞等。(2)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化，将质粒导入大肠杆菌时，常用的转化方法是：首先用 Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞。噬菌体 DNA 没有侵染能力，体外重组的噬菌体 DNA 通常需与外壳蛋白组装成完整噬菌体才能完成侵染过程。噬菌体...
