第 1 讲 无菌操作技术[考纲展示] 1.微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用考点一| 微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌① 分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。② 作用：微生物分离和培养的基础。③ 关键：防止外来杂菌的入侵。(2)配制培养基① 培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。② 分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。(3)接种微生物① 接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。② 接种方法和常用工具(连线)接种方法 常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种答案：Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节 pH →分装→包扎→灭菌→搁置斜面。(2)斜面接种和培养大肠杆菌① 主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。② 主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在 37_℃ 恒温箱 中培养大肠杆菌 24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。(3)平板划线分离和培养大肠杆菌① 平板的作用：培养、分离细菌等微生物。② 平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。[思考回答]1．微生物接种的核心是什么？提示：防止杂菌污染，保证培养物的纯度。2．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。(1)获得图 A 和图 B 效果的接种方法分别是什么？提示：图 A 效果是稀释涂布平板法，图 B 效果是平板划线法。(2)某同学在用 A 方法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。提示：菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)。不可以，因为抗生素不但杀灭杂菌，而且也可以杀灭大肠杆菌，因此在培养基上不可以加入抗生素。1．选择无菌技术的原则(1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。(2)考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。2．微生物的培养基(1)培养基的成分营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物a...
