乳酸菌得分离、纯化与鉴定第一部分:乳酸菌得分离、纯化一、实验器材:1、实验药品 新奇乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙;0、4gNaOH 固体、4、2ml 浓 HCL(分析纯) 、20gCaCO3 固体、酵母膏 20g 、琼脂 30g香柏油、脱脂奶粉 100g 、蔗糖 10g;2、仪器与设备 高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培育箱、pH 试纸、酸乳瓶、培育皿(φ9 或 φ12)、试管、300ml 三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml 锥形瓶、250ml 锥形瓶、250ml 烧杯。二、实验步骤:1、培育基配制(BCG 牛乳培育基): (A)溶液:取脱脂乳粉 100g,水 500ml,加入 1、6%溴甲酚氯乙醇溶液 1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅 80℃灭菌 20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用 1、6g 溴甲酚绿加入 20ml 无水乙醇中,再加水至 100ml 制成) (B)溶液:酵母膏 10g,水 500ml,CaCO3 10g,琼脂 20g,加热溶解,用精密 pH 试纸调节 pH 到 6、8,分装入三角瓶后在 103kPa 121℃高压蒸汽灭菌 20Min。以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。2、药品配制2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫 2g 溶于 20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液 80ml。将两液混匀,放置 24 小时后过滤即可。2、2 卢哥氏碘液:碘 1g,碘化钾 2g,蒸馏水 300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水 300ml 即成。2、3 蕃红溶液:番红 2、5g,95%乙醇 100ml,溶解后存于密闭得棕色瓶中。用时取 20ml 与 80ml 蒸馏水混匀即可。2、4 0、1%得吕氏美蓝染液:A 液:美蓝 0、3g,95%乙醇 300ml;B 液:0、01% KOH 100ml。混合 A 与 B 液即成,按 1:100 稀释即可。2、4 生理盐水:称取 9g 氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到 1000 毫升。3、菌悬液得配制 取 1 洁净三角瓶,盛以 225ml 生理盐水;7 只洁净试管,各盛 9ml 得生理盐水;加塞包扎于在 103kPa 121℃高压蒸汽灭菌 20Min,得到无菌生理盐水。将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品 25ml 加入盛有 225ml 无菌生理盐水得三角瓶中,在旋涡均匀器上充分振摇,使样品均匀分散,即为 10-1 得样品稀释液; 将 7 只装 9ml 生理盐水得无菌试管,依次标记 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,再用无菌移...
