附录:常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂得配制碳酸盐缓冲液(CarbonateBicarbonate Buffer)由于碳酸盐 pH 值偏碱,因此,常用于 pH>9 得缓冲液配制(附表 1)。附表 1、 0、2 mol/L 碳酸盐缓冲液(pH9、2～10、7)pH0、2mol/L Na2CO3(ml)0、2mol/L NaHCO3 (ml)pH0、2mol/L Na2CO3(ml)0、2mol/L NaHCO3 (ml)9、24、046、010、027、522、59、37、542、510、130、020、09、49、540、510、233、017、09、513、037、010、335、514、59、616、034、010、438、511、59、719、530、510、540、59、59、822、028、010、642、57、59、925、025、010、745、05、0磷酸缓冲液(Phosphate Buffers,PB) 磷酸盐就是使用最广泛得一种缓冲剂,由于它们就是二级解离,有二个 pKa 值,所以用它们配制得缓冲液,pH 范围最宽。NaH2PO4:pKa1＝2、12,pKa2＝7、21; Na2HPO4:pKa1＝7、21,pKa2＝12、32。另外,磷酸盐还有钾盐分子形式,一般来说,低温时钠盐难溶,钾盐易溶,因此,配制细胞培育用试剂时常常添加钾盐试剂,但若配制十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳得缓冲液时,只能用钠盐而不能用钾盐,因为 SDS 会与磷酸钾生成难溶得十二烷基硫酸钾。磷酸缓冲液得优点为:① 可配制成不同离子强度得缓冲液;② 适用 pH 缓冲范围较宽;③ 受温度影响缓冲液 pH 值变化较小;④ 离子强度对缓冲液 pH 影响较小,如 0、1mol/L 缓冲液稀释 10 倍其 pH 变化小于 0、1。磷酸缓冲液得缺点就是:① 磷酸盐易与钙离子(Ca2+)、镁离子(Mg2+)及重金属离子结合生成不溶得沉淀物;② 可能干扰某些生物化学反应过程,如对某些酶得催化活性具有一定程度得抑制作用。NaH2PO4得 pH 值偏酸性,可用作 pH<4 得缓冲液。Na2HPO4得 pH 值偏碱性,可用作 pH>10 得缓冲液。而 pH＝6～8 得中性缓冲液就是更常用得缓冲液,需要 NaH2PO4与 Na2HPO4两种磷酸盐混合配制(附表 2)。附表 2、 0、2 mol/L 磷酸盐缓冲液(pH5、7～8、2)pH0、2mol/L NaH2PO4(ml)0、2mol/L Na2H PO4 (ml)pH0、2mol/L NaH2PO4(ml)0、2mol/L Na2H PO4 (ml)5、793、56、57、039、061、05、892、08、07、133、067、05、990、010、07、228、072、06、087、712、37、323、077、06、185、015、07、419、081、06、281、518、57、516、084、06、377、522、57、613、087、06、473、526、57、710、589、56、568、531、57、88、591、56、662、537、57、97、093、06、756、543、58、05、394、76、851...
