高效液相色谱法的计算方法高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 1、 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录Ⅳ A）项下对溶剂的要求。正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于 20 分钟内记录完毕。2、系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对比品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。(1) 色谱柱的理论板数(N，用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效)。在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间 tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽(Wh/2)，按 n＝5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数，假如测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。(2) 分离度(R) 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度 R 的计算公式为： R＝2(tR2－tR1)/( W1＋W2)。式中 tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W1及 W2为此相邻两峰的峰宽。除另外有规定外，分离度应大于 1.5。(3) 拖尾因子(T) 为保证测量精度，特别当采纳峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子 T是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算...
