2 基因工程的基本操作程序 （一）教学目的：l．简述基因工程原理及基本操作程序重点难点：重点：基因工程操作程序的四个步骤难点：（1）从基因文库中猎取目的基因（2）利用 PCR 技术扩增目的基因教学手段：多媒体辅助教学新课引入：简单介绍基因的结构包括原核基因和真核基因的结构；阅读教材相关内容，看图说明基因操作的四个步骤：一、提取目的基因—将需要的基因从供体中提取出来1
目的基因：编码蛋白质的结构基因2
猎取目的基因的方法：（1）从基因文库中猎取目的基因① 基因文库概念：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体中，各个受体菌分别含这种生物的不同基因，称为基因文库
种类：基因组文库：含一种生物的所有基因
（常用方法：鸟枪法） 部分基因文库（cDNA 文库）：含一种生物的部分基因
（常用方法：反转录法）比较基因组文库与 CDNA 文库的区别和联系（2）利用 PCR 技术扩增目的基因①PCR 概念：一项在生物体外复制特定的 DNA 片段的核酸合成技术② 条件：已知目的基因的核苷酸序列（示 PCR 动画过程）③ 过程：目的基因受热形成单链 DNA（94℃）单链 DNA 与引物结合（55℃）在 DNA 聚合酶作用下延伸成 DNA（72℃）④ 方式指数扩增：2n⑤ 原理：DNA 复制思考：PCR 技术与生物体内 DNA 复制相比，有何异同
（3）人工合成法即已知蛋白质氨基酸序列—推出 mRNA 序列—目的基因序列思考：人工合成法合成的目的基因具有何特点
二、基因表达载体的构建1
基因表达载体的构建过程同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用 DNA 连接酶把两者连接
目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）2
构建目的基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用
表达载体的组成： 目的基因 基因表达 启动子：位于
