Paek5 用酶免疫复合膜检测血浆中的高密度脂蛋白 ( HDL)其层析条由四部分组成 : (1) 硝酸膜抗体板 ,包被有抗载脂蛋白B100 (Apo B100) 抗体 。( 2) 纤维素膜酶板 , 含有胆固 醇 脂 化 酶( CE) ,胆固醇氧化酶 ( CO) ,脂溶剂 , HRP 的底物 。(3) 硝酸膜信号板 ,含有 HRP。(4) 纤维膜吸水板 。四部分组成完整的层析膜 。极低密度脂蛋白 (VLDL) 和低密度脂蛋白 (LDL) 表面有 ApoB100 抗原 ,血浆流经抗体板时 ,它们被抗体吸附而阻滞 。HDL表面不含 Apo B100 抗原 ,则泳动到酶板 ,经脂溶剂溶解释放出免疫层析 ( Immunochromatography IC) 是八十年代初进展起来的一种快速免疫分析技术 。它的原理是 : 借助毛细作用 ,样品在条状纤维制成的膜上泳动 ,其中的待测物与膜上一定区域的配体结合 ,通过酶促显色反应或直接使用着色标记物 ,短时间 (20min 内) 便可得到直观的结果 。它不须进行结合标记物与自由标记物的分离 ,省去了繁琐的加样 、洗涤步骤 ,因而操作简单 ,快速 ,人员不用培训 ,且不需或仅需简单的仪器 。非常适免疫层析按其原理可分为两类 ,一类以酶促反应显色为基础 ,以显色高度来定量 ;另一类则使用着色标记物如乳胶颗粒 、胶体硒 、胶体金以及脂质体等 ,层析时 ,标记物与待测物的络合物被相应的配体捕获而浓集显色 ,以纤维膜上显色条的有无或多少来定性或定量 。Beggs 等1 1990 年设计了一 种 方 法 。将 含 有 胶 体 金2抗α2HCG 单抗络合物的玻璃纤维垫贴于硝酸膜的一端 ,中间是用抗体包被成“ + ”字型的检测区 ,其竖线包被的是抗2β2HCG 多 抗的 F (ab) 2 片段 ,横线是抗鼠 IgG 多抗 。另一端是含 p H 指示剂的终点指示区 。加样后 , 玻 璃 纤 维 垫 上 的 络 合 物 与 样 品 中 的HCG结合 ,复合物在毛细作用下向上泳动 ,在检测区与抗体结合形成“ + ”号 , 如 无 HCG , 络 合 物 只 与 横 线 上 的 多 抗 结 合 成“ - ”号 。当溶液泳动到另一端时 ,指示剂变色 ,表示试验结束 ,可以读取结果 。Horton 等2 1991 年检测鼠 IgG 时 ,将含有羊抗鼠 IgG( Sigma产) 的醋酸膜贴于硝酸膜的一端作为检测区 ,膜上其余结合位点用聚乙烯醇封闭 。在硝酸膜的另一端加上蔗糖以利标记络合物的泳动 。标记有胶体金的羊抗鼠 IgG(Amersham 产) 加于蔗糖处理过的一端 ,在该端加...
