免疫组化方法中关键环节及其原理解述免疫组化方法中关键环节及其原理解述 一、酶免疫组化的关键环节 1、标本固定：固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存
2、脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要洁净和锐利
否则，容易裂片和脱片等
3、脱蜡和水化：这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应
脱蜡可以先 60 度 20min，然后立即二甲苯 1-3 分别 10min，但当天制好的切片可以 60 度 3-4h
水化用梯度乙醇（由高到低）
若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色
4、抗原修复：由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率
常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复
修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高 pH 的等）
我们实验室一般用微波修复中火6min*4 次，效果不错
注意微波修复后自然冷却 30min 左右（只要你觉得修复液的温度达室温即可）
5、细胞通透：目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应
一般用Triton X-100、蛋白酶 k 等通透液
如 Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推举使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合
在免疫组织化学（>10um 厚切片）和免疫细胞化学中一般用 Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔
6、灭活内源性过氧化物酶和生物素：在传统的 ABC 法和 SP 法中，免
