实验一 薄层层析板得制备一、实验目得 制备薄层层析板,使叶绿素在层析板上分离显色
二、实验原理薄层层析,常用 TLC(C hro m atograp h y)表示,又称薄层色谱,属于液-固吸附色谱
就是近年来进展起来得一种微量、快速而简单得色谱法,它兼备了柱色谱与纸色谱得优点
一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至 0、01 μ g )得分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条线,则可分离多达 500 m g 得样品
因此又可用来精制样品
故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析得物资
薄层吸附色谱得吸附剂最常用得就是氧化铝、硅胶、硅藻土、聚酰胺与纤维素
其颗粒大小,一般要求直径为 10~4 0 μm
硅胶就是无定形多孔性物质,略具酸性,适用于酸性物质得分离与分析
薄层色谱用得硅胶分为: “硅胶 H ”—不含粘合剂;“硅胶 G ”—含煅石膏粘合剂;“硅胶 HF 2 5 4 ”—含荧光物质,可用于波长为 25 4n m 紫外光下观察荧光;“硅胶 G F 2 5 4 ”—既含煅石膏又含荧光剂等类型
粘合剂除上述得煅石膏(半水合硫酸钙: 2C aSO 4 · H 2O )外,还可用淀粉、羧甲基纤维素钠
三、实验材料、器具1、试剂 硅胶、4‰得 CMC 溶液(羧甲基纤维素钠)2、实验用具:药匙、研钵、载玻片、量筒、玻棒四、实验步骤1、载玻片要求平滑清洁,没有划痕,在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤,再用水冲洗洁净
(洁净得标准:水不就是呈股流下,而就是呈瀑布状态流下
)2、与硅胶混合:CM C-Na 溶液与硅胶得比例为 3:1(3ml:1g)
取 CM C-Na 溶液倒入研钵中,然后加入硅胶,在研钵中研磨,按一个方向研磨,自下而上,然后自上而下,以赶尽气泡为佳
3、铺板:将载玻片置于平台上,用药匙舀取糊状硅胶,均匀地铺在载玻片表面.