籽粒蛋白含量实验计划一、实验材料：w6nk2，浙农 8 号成熟籽粒二、分析测定指标：成熟籽粒在 80 度烘箱中烘干至恒重，用样品粉碎机(DFT50 高速中药粉碎机)粉碎，过0.5mm 筛。依据 Liu 等(2025)提出的方法利用 0.5g 样品顺序提取蛋白质组分：清蛋白，0.5g 样品加 10ml 10mM Tris-HCI(pH7.5)室温下置于连续振荡器上提取两次，每次 2h，为提取残留物离心(4000g)10 分钟，两次提取的上清液合并保存。依据同样步骤， 球蛋白，加10ml1M NaCl ， Tris-HCI 在 室 温 下 提 取 两 次 ， 每 次 2h ； 醇 溶 蛋 白 ， 加 15ml 55 ％ 正 丙醇(v/v)，Iris-HCl 室温下提取两次，每次 2h；谷蛋白，残留物加 25ml 0.24％五水合硫酸铜，1.68％KOH，0.5％酒石酸钾钠和 50％(v/v)异丙醇提取显色液，室温震荡 1.5h，再在 60 度恒温水浴震荡 5min，离心(4000 g)10min，550nm 比色测定。2、蛋白质总量、蛋白组分含量的测定大麦籽粒蛋白质总量用近红外光谱分析仪(NIRA，Matrix.1，Bruker Co.，德国)测定，用本实验室早期建立的相关曲线计算(Yin 等，2025)。清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白含量利用考马斯亮蓝法以牛白蛋白做标准曲线测定(Bradford，1976)，谷蛋白用 Biuret 法测定(Holme 和 Peck，1998)。或者蛋白质总量采纳下面方法测定：在装有 50mg 面粉放入 2 ml 离心管中，加入 150 µl 提取液（ 10g KH2PO4 ，13g K2HPO4·3H2O，385mg DTT，加水至 500ml），拧紧离心管盖子，室温下剧烈震荡 1h。将匀浆 1000g 离心 8min 后，取上清用来测定蛋白质含量并跑电泳检测。蛋白质含量用 Bradford (1976)方法测定，以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白。
