遗传学实验6 大肠杆菌非中断杂交试验生01 胡璞 2025012345同组成员：王雨川、朱忻怡、廉云实验日期：2025.03.29~04.06一、实验目的1.1 学习和了解微生物进行遗传物质传递的几种方法，特别是其中细菌有性杂交的原理。1.2 掌握大肠杆菌杂交的原理，特别是F+，F-和Hfr菌株的异同点，并学会利用非中断杂交法进行基因定位的技术原理和方法。1.3 在掌握上述技能的基础上，完成大肠杆菌非中断杂交的实验，根据结果推断不同目标基因在大肠杆菌基因组中的相对位置，并初步绘制基因图谱。二、实验原理2.1 含有F因子的F+菌株通过接合将F因子传递给F-菌株计量补偿效应是导致多于一条的X染色体失活的原因； 2.2 不同的Hfr品系中，F因子和主染色体的整合位置不同，染色体的转移是单方向性的，染色体上的基因都是连锁的； 2.3 位于Hfr染色体上前面的基因将有更多的机会出现在F-中，越是后端的基因出现的机会越少。因此，根据细菌结合后F-菌中Hfr上基因出现的多少就可测定基因的相对位置； 2.4 实验中采纳选择培育基筛选法筛选不同的重组子。三、实验材料和用具3.1 实验仪器和用具恒温培育箱、电子天平、超净台、玻璃杯、酒精灯、称量纸、药匙、玻璃平皿、试管、三角瓶、移液器、涂布棒、牙签、蒸馏水、烧杯3.2 实验材料和试剂：3.2.1 菌株 供体菌：E. coli CSH60 Hfr strs受体菌：E. coli 57B F- 缺陷型 （met-leu-trp-his-arg-lac-gal-ade-ilv-strr）3.2.2 实验试剂液体BP培育基、10XA磷酸缓冲液、生理盐水、糖溶液、硫酸镁溶液、盐酸硫胺素、链霉素溶液、氨基酸溶液、腺嘌呤、选择培育基、A平板培育基。 四、实验过程和步骤 4.1 杂交：用取液器分别吸取供体菌0.2 mL，受体菌4 mL混合于一个三角瓶中，置于摇床37 ℃、200 r/min下振荡培育1.5 h； （为的是让供体菌完全杂交）4.2 稀释涂布：将杂交液稀释5倍，从中吸取0.1mL到A平板培育皿上，用涂棒将杂交液涂布均匀，并置于37℃恒温培育箱中倒置培育； 4.3 杂交重组体的筛选：由于供体和受体菌在A平板培育基上都不能生长，所以在A培育基上长出的菌落即为重组型的。观察几块A平板培育基上菌落的生长情况，找菌落分离清楚的进行转移，在选择培育基上进行重组体的鉴定：用无菌牙签挑取A平板上的菌落100个，分别接种在B~G选择培育基的对应位置，37 ℃恒温培育约28h后统计各板上长出的菌落数；4.4 杂交重组体的计数：同组成员两人一组统计各个平板上长出的菌落数（两人计数然...
