浙江大学电子显微镜室 浙江大学生物技术讨论所胶体金免疫标记技术培训班技术资料胡东维 洪 健 徐 颖浙江大学2001 年 10 月一、胶体金的制备根据不同的制备方法,可以制备出直径 1－500nm 的胶体金粒子，但做为免疫标记探针，其直径应在 3—30nm 范围内
在氯化金(HAuCl4)水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子
使用不同种类、不同剂量的还原剂，可以控制所产生的粒子大小
即粒子大小取决于反应溶液中最初还原试剂和还原核的数量
还原剂浓度越高,核浓度也越高，氯化金的还原也就从更多的还原中心开始,因此产生的胶体金粒子数量越多,但体积也越小
粒子直径每增加一倍，数量减少为原来的 1/8
以柠檬酸钠和单宁酸做还原剂,能够制备大小相对一致、直径 3～16nm 的胶体金
因此一般胶体金探针均使用该方法进行
但该方法制备的胶体金粒子直径范围较窄，而且残留的多聚单宁酸残基往往干扰某些蛋白与金粒子的结合
此时在溶液中添加 0
2％的 H2O2能够去除这些残基
双标记或制备 5-10 nm 的胶体金时建议使用该方法
利用柠檬酸为还原剂,可以制备 12~150 nm 直径的胶体金
但制备大体积的胶体金时，胶体金粒子的误差也同时增加
因此做单标记时,建议使用该方法制备 12-16 nm 直径的胶体金
除了上述方法外,也可以用磷作为还原剂来制备 5 nm 的胶体金，它避开了单宁酸残基的问题，但所形成的金粒子体积变化较大
磷易燃且有毒，制备的残液需进一步处理,故该方法已经很少使用
氯化金极易吸湿，故一般均以小剂量密封保存（0
5g 或 1g），因此在配制氯化金溶液时一次配完，临时不用的可以用 1
5 ml 试管分装为 1 ml 保存（—20℃）
注意各种玻璃器皿一定要洗净并用双蒸水多次冲洗,有条件时可硅化处理（1%双氯硅烷/氯仿浸泡 1 小时，烘干）
配制各种试剂时均使用双蒸
