基因工程的基本操作程序 一、基因工程的基本操作程序目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定
二、目的基因的获取1．从基因文库中获取(1)基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段 ，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因
(2)基因文库的种类：① 基因组文库：包含一种生物的所有基因
② 部分基因文库：包含一种生物的一部分基因
2．利用 PCR 技术扩增(1)原理：DNA 双链复制
(2)过程：3．人工合成(1)条件：基因比较小，核苷酸序列又已知
(2)方法：通过 DNA 合成仪 用化学方法直接人工合成
三、基因表达载体的构建1．构建基因表达载体的目的(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代
(2)使目的基因能够表达和发挥作用
2．基因表达载体的组成[填图]1
基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等
2．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法
3．将目的基因导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2＋处理法)
4．检测目的基因是否导入受体细胞常用 DNA 分子杂交技术；检测是否转录，常用分子杂交技术；检测是否翻译，常用抗原一抗体杂交技术
四、将目的基因导入受体细胞1．导入植物细胞(1)农杆菌转化法：① 原理：农杆菌 Ti 质粒上的 T DNA 可整合到受体细胞的染色体 DNA 上
② 适用范围：主要适用于双子叶植物和裸子植物
(2)基因枪法：常用于单子叶植物
(3)花粉管通道法：目的基因借助花粉管通道进入受体细胞
2．导入动物细胞(1)常用方法：显微注射技术
(2)受体细胞：受精卵
3．导入微生物细胞(1)方法：感受态细胞法，即用 Ca 2 ＋ 处理细
