课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标：1
明确用培养基对微生物进行选择的原理
(重点) 2
学会统计微生物数量的方法
(重点) 3
能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析和评价
(难点)1．研究思路(1)筛选菌株的思路① 自然界中目的菌株的筛选ⅰ 依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找
ⅱ 实例：PCR 技术过程中用到的耐高温的 Taq DNA 聚合酶 ，就是从热泉中筛选出来的 Taq细菌中提取出来的
② 实验室中目的菌株的筛选ⅰ 原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长
ⅱ 方法：利用选择培养基分离
a．选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基
b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
(2)统计菌落数目① 常用方法：稀释涂布平板法
ⅰ 原理ⅱ 计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M
C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (mL)
M：代表稀释倍数
ⅲ 注意事项a．为了保证结果准确，一般设置三个平板，选择菌落数在 30 ～ 300 的平板进行计数，并取平均值
b．统计的菌落数往往比活菌的实际数目低
原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示
c．设置对照：主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
② 其他方法：利用显微镜直接计数
2．实验设计及操作提示(1)实验设计 ① 土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样
先铲去表层土，在距地表约 3 ～ 8 cm 的土壤层取样
② 样品的稀释ⅰ 稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目
