第二章 克隆技术 第三节 动物的克隆动物克隆技术的基础是动物的细胞和组织培养，细胞培养主要是体外人工培养方法进行实验。细胞全能性的揭示、细胞周期调节控制机理的分析、癌变机理和衰老原因的研究都与细胞培养技术密不可分。一、动物细胞的培养和克隆形成1．动物细胞、组织培养细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就停止分裂增殖。(1)动物细胞培养的方法进行动物细胞培养时，首先将组织块剪碎，用机械法或胰酶处理，使其分散成许多单个细胞，然后，在人工控制的条件下，使这些细胞生存和生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡等生命活动现象。由于细胞培养中，细胞之间并非彼此独立而是在生命活动中相互依存，所以在某种程度上像体内一样呈现一定的组织特性。(2)动物组织培养的含义胰酶能使细胞分散开的原因是可分解细胞间的胶原蛋白，使细胞间的联系性减小。动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。(3)动物细胞、组织培养的关系① 二者在离体情况下，都能培养并表现正常的生命活动；② 不同点是，动物组织培养在得到离体组织后，需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散的细胞再进行细胞培养，同时动物组织培养过程中可以伴随组织分化。2．动物组织培养技术的发展(1)发展简史及近况① 萌芽时期在 19 世纪，1885 年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。②1903 年，皮肤及白细胞培养在腹水及血清中细胞存活时间长达 1 个月。③1907 年真正的组织培养开始，并在蛙胚神经管培养中看到了神经纤维末端的阿米巴运动。(2)动物组织培养的流程取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养。转化即正常细胞在某种因子的作用下发生突变而形成具有癌性的细胞。① 原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后(一般 10 代以内)停止生长，需要重新更换培养基。② 传代培养：将原代培养的细胞从一个培养瓶转移到另一个培养瓶，叫传代培养。有时也把最初的若干次传代培养归入原代培养范围。正常细胞培养时，细胞传到一定代数便会衰老、死亡，不能无限制地传下去，但有些突变和转化的细胞却无限传代。如 HeLa 细胞系就是 1951 年从一位黑人宫颈癌患者的癌细胞培养至今而形成的肿瘤细胞系。3．细胞系...
