第 2 课时 分离以尿素为氮源的微生物考试要求知识内容考试属性及要求考情解读分离以尿素为氮源的微生物加试1.进行微生物分离。使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。一、实验目的、原理、设备、用品及材料准备1.实验目的(1)使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。(2)利用指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。2.实验原理(1)脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。(2)(NH2)2C＝O＋H2O――→2NH3＋CO23.设备及用品灭菌锅或高压锅、250 mL 的三角瓶 1 个和 100 mL 的三角瓶 2 个、封口膜和橡皮圈、培养皿4 个、接种环和玻璃刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有盖的试管(15 mm×150 mm)5 支和试管架、移液器。4.实验材料(1)在 100 mL 烧杯中装入 50 mL 70%酒精，将玻璃刮刀浸泡在其中。(2)在 100 mL 三角瓶中配制好 25 mL 全营养 LB 固体培养基 (0.25 g 蛋白胨，0.12 g 酵母提取物，0.25 g NaCl 和 0.5 g 琼脂糖，水 25 mL)，加上封口膜后灭菌待用。(3)在 100 mL 三角瓶中配制好 25 mL 尿素固体培养基(0.025 g 葡萄糖，0.12 g NaCl,0.12 g K2HPO4,0.25 mg 酚红和 0.5 g 琼脂糖，水 15 mL)，加上封口膜后灭菌，待冷却至 60 ℃时，加入通过 G6 玻璃漏斗过滤 (使之无菌)的 10 mL 尿素溶液(内含 2 g 脲)，摇动，混合均匀后待用。(4)将盛有 4.5 mL 蒸馏水的 5 支有塞试管灭菌后待用。(5)在 250 mL 三角瓶中装入 99 mL 蒸馏水，用封口膜盖上，灭菌后待用。(6)土样 1 g(从有哺乳动物排泄物的地方取得)。1.为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？答案 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量非以尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故而用经纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂。2.分离以尿素为氮源的微生物实验所用培养基为尿素固体培养基。在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，琼脂糖的...
