第二节 基因工程的原理和技术1.简述基因工程的原理
描述基因工程基本操作的几个步骤
(重点)一、基因工程的基本要素 多种工具酶、目的基因、载体和宿主细胞等
二、基因工程的基本操作步骤1.获得目的基因(1)目的基因:人们所需要的基因
如:人的胰岛素基因、植物的抗病基因等
(2)获取方法① 如果目的基因的序列是已知的,可用化学方法合成目的基因,或者用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因
② 如果目的基因的核苷酸序列是未知的,可以从基因文库中获取
2.形成重组 DNA 分子通常是用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体 DNA(如质粒),使其产生相同的粘性末端,然后用 DNA 连接酶 将两者连接在一起,形成重组 DNA 分子
1.基因工程中的 DNA 重组与减数分裂过程中的 DNA 重组完全相同吗
提示:不完全相同
前者属于无性重组,可发生在不同种生物间,后者属于有性重组,发生在产生配子的过程中
3.将重组 DNA 分子导入受体细胞(1)常用的受体细胞:大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等
(2)导入方法举例:用质粒作为载体,宿主细胞应该选择大肠杆菌,用氯化钙处理大肠杆菌,增加其细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入大肠杆菌宿主细胞
4.筛选含有目的基因的受体细胞(1)筛选原因:不是所有细胞都接纳了重组 DNA 分子
(2)筛选方法举例:由于质粒上有抗生素抗性基因,如四环素的抗性基因,含有这种重组质粒的受体细胞能够在有四环素的培养基中生长,而没有接纳重组 DNA 分子的细胞则不能在这种培养基上生长
这样就能筛选到含有重组 DNA 分子的受体细胞
经过培养,目的基因能够和质粒一起在宿主细胞内大量扩增
5.目的基因的表达目的基因在宿主细胞中表达,产生人们需要的功能物质
2.在基因工程的操作步骤中,都发生碱基互补配对
“重组 DNA 分子导入