实验案例 土壤中某样品细菌的分离与计数实验的具体操作步骤如下。1.土壤取样 从肥沃、湿润的、近中性的土壤中取样。先用灭菌的铁铲铲去表层土 3 cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好的灭菌信封中。2.制备培养基 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为 103～107。每个稀释度下需要 3 个选择培养基，1 个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要 15 个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基用于接种。此外，还需要准备未接种的牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基各 1 个、7 个灭菌的试管和 1 个灭菌的移液管。3.微生物的培养与观察 参考课本中图 2-7 的实验流程示意图，在酒精灯火焰旁称取 10 g 土样并将其加入盛有 90 mL 无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为 250 mL），充分摇匀，静置沉淀后，吸取上清液 1 mL，转移至盛有 9 mL 的无菌生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至 107稀释度，并按照由 107～103稀释度的顺序分别吸取 0.1 mL 稀释液进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。平板和试管在使用前要做好标记。然后将涂布好的培养基和未接种的牛肉膏蛋白胨培养基、选择培养基各 1 个同时放在30 ℃恒温箱中培养 1～2d。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。每隔 24h 观察比较上述培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录、填入表格。选择培养基菌落数统计表稀释度103104105106107123平均值123平均值123平均值123平均值123平均值菌落数/平板菌落数/克土壤挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红指示剂培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图 2-10 的颜色反应。4.细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 30～300 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对 3 个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
