高考资源网第 1 节 大肠杆菌的培养和分离一、培养基的配置：我们用牛肉膏蛋白胨培养基来培养大肠杆菌。配置 1000ml 的培养基（可由教师在实验前配置好，也可由学生分小组后在实验课上操作）。1、配方：牛肉膏 5g蛋白胨 10gNacl 5g琼脂 20g2、称量：准确称取各成分。3、溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到 1000mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。4、调 pH：用 1mol/L NaOH 溶液调节 pH 至 7.0——7.2。5、灭菌：将配置好的培养基转移到锥形瓶中，加上棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，集中放入高压灭菌锅内，121 摄氏度、100 千帕压力下灭菌 15min。5——8 套培养皿用旧报纸包作一包，于干热灭菌锅内 160——170℃条件下灭菌 2 小时。6、倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至 50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。二、大肠杆菌的接种、培养：1、接种常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。（1）平板划线法：① 操作步骤：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第 1 次平行划线 3～5 条，转动培养皿约 70°角，用烧过冷却的接种针，通过第 1 次划线部分作第 2 次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成 30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。② 该方法原理及其注意事项：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线到最后，可使细菌间的距离加大。在培养 10～20h 后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管...
