专题能力训练十六基因工程1
(2018天津理综)甲型流感病毒为RNA病毒,易引起流感大规模流行
我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法,主要环节如下
(1)改造病毒的部分基因,使其失去在正常宿主细胞内增殖的能力
以病毒RNA为模板,逆转录成对应DNA后,利用技术扩增,并将其中某些基因(不包括表面抗原基因)内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列
与改造前的基因相比,改造后的基因表达时不能合成完整长度的,因此不能产生子代病毒
将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒,并保存
(2)构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞
设计合成一种特殊tRNA的基因,其产物的反密码子能与(1)中的终止密码子配对结合,并可携带一个非天然氨基酸(Uaa)
将该基因与连接后导入宿主细胞
提取宿主细胞的进行分子杂交鉴定,筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞
(3)利用转基因宿主细胞制备疫苗
将(1)中的重组质粒导入(2)中的转基因宿主细胞,并在补加的培养基中进行培养,则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA,翻译出改造病毒基因的完整蛋白,产生大量子代病毒,用于制备疫苗
特殊tRNA基因转录时,识别其启动子的酶是(单选)
病毒的DNA聚合酶B
宿主的DNA聚合酶C
病毒的RNA聚合酶D
宿主的RNA聚合酶(4)上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖,没有致病性,因此不经灭活或减毒即可制成疫苗
与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比,该病毒活疫苗的优势之一是可引起免疫,增强免疫保护效果
答案:(1)PCR多肽(或蛋白质)(2)载体总RNA(3)非天然氨基酸(Uaa)D(4)细胞解析:(1)利用逆转录得到病毒DNA后,可利用PCR技术对该DNA进行扩增
据题意,改造后的某些基因在表达时会提前终止,不能合成改造前完整长度的多肽或蛋白质
(2)导入宿主细胞的是携带目的基因的载体