革兰氏染色法的原理及其练习摘要：革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特性，因此学习微生物学，进行革兰氏染色试验是很重要的。为保证染色成果的对的性，采用规范的的染色操作措施是十分必要。本试验重要对大肠杆菌（Escherichiacoli）、金黄色葡萄球菌（StaphyloccocusaureusRosenbach）、枯草杆菌（Bacillussubtilis）进行革兰氏染色，观测它们的染色特性，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染色措施。染色措施与过程很清晰，但试验成果中金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach）多组展现假阴性。本试验的重要目的是熟悉并掌握革兰氏染色措施及原理，但要想做出很好的染色得多加练习。本试验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。关键词：革兰氏染色大肠杆菌(E.coli)金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)枯草杆菌(B.subtilis)引言革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色措施，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，这是由这两种细菌细胞壁构造构成与构造的差异所决定的。通过一定的染色过程后，革兰氏阳性的细菌会由于细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝色被洗脱，复染后变为红色。革兰氏染色原理很简朴，染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不适宜过厚，严格控制脱色时间。大肠杆菌(E.coli)是革兰氏阴性细菌，金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)与枯草杆菌(B.subtilis)都是革兰氏阳性细菌，染色后在显微镜下轻易区别。同步它们的形态各异，可以根据详细颜色和形态差异来判断染色与否成功。本试验还波及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不一样，详细使用在试验措施中描述。1.1材料1.1.1菌种大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。1.1.2溶液与试剂无菌生理盐水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染夜，香柏油，二甲苯1.1.3仪器酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶，接种环，滴管等1.2措施1.2.1制片：取活跃生长期菌种按常规措施涂片（不要太厚）、干燥和固定。1.2.2染色（1）初染：滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色2min，水洗至流出水无色。（2）媒染：用卢戈氏染液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无色。（3）脱色：将玻片上的水用吸水纸吸取，用滴管流加95%乙醇脱色（持续20秒），稍后立即洗去乙醇。（4）复染：将玻片上的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，吸去残水烤干。1.2.3镜检分别用香柏油覆盖涂菌部位，先用低倍镜找到菌，换用的物镜观测染色状况。观测结束后，用二甲苯擦洗镜头。2．试验成果与分析2.2成果分析大肠杆菌竟革兰氏染色后展现红色，3个图片上都是红色，因此大肠杆菌应当是革兰氏阴性细菌，与事实相符，染色成功。金黄色葡萄球菌比较难染色，从成果中可以分析，前两个涂片的菌种也许培养的时间太长了。由于老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而导致假阴性，老龄的G+细菌细胞壁老化，不能在乙醇处理的时候使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，从而在复染时被染红。枯草杆菌染色成果很好，蓝紫色很明显，染色成功。1.3.3小结1、获得本试验成功的关键：固定期烘烤要适度，太轻会在冲洗时冲走细菌，过度会破坏细菌形态；脱色的时间要严格控制，脱色不够导致假阳性，脱色过度会出现假阴性；选用新培养的菌种，涂片时不能太厚。这些问题在试验过程中几乎均有出现，尤其是对于初学者尤其需要注意。2、革兰氏染色可以迅速将细菌分为阴性和阳性，是很重要的染色措施，也是相称复杂的染色措施。通过练习革兰氏染色，既掌握了一般的染色措施，又为后来技术规定更高的染色，观测，鉴别奠定了基础。
