第1页共12页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共12页“生物检验检疫”课程实验教案授课人：陈勇实验一：病料的采集及病原菌的分离和培养方法(一)病料采集学习目的：了解常见病料的采集部位，掌握病料采集注意事项，学会进行常见病料采集。一：血液的采集根据检验项目及需要血液料的多少，可以选用静脉采血或心脏采血。（一）静脉采血鱼是尾静脉；马，牛，羊犬，猫一般多在颈静脉；成年猪在耳静脉；6个月以内的猪在前腔静脉；禽在翅静脉采血。前腔静脉的采血术是：猪仰卧，拉直两前肢使两前肢向后与体中线平行。手持针管，针头斜向后内方与地面呈60度角，向右侧或左侧胸前窝刺入，进针2~3厘米即可抽出血液。术后局部常规消毒。（二）末梢或小静脉采血马牛可在耳尖部采血：局部剪毛，酒精消毒，用18号针头刺入1厘米左右，血液即可流出。猪羊兔等可穿刺耳边缘小静脉。（三）心脏采血禽或试验小动物需要血量较多时可采用本法。禽的采血：右侧卧保定，左侧胸部向上，取一个10毫升注射器，接上长约5厘米的针头，从胸骨脊前端至背部下凹处连接线的中点，垂直或稍向前内方刺入2~3厘米即可。兔或豚鼠等的采血：在胸部左侧触及心脏跳动处垂直刺入，边刺边抽注射器内塞，将血取出。二：其他病料采集（一）乳汁的采集乳头及术者的手用新洁尔灭消毒，将最初挤出的乳汁弃去，采10~20毫升左右乳汁与灭菌容器中。（二）脓汁，鼻液，水疱液，水肿液的采集用灭菌棉拭子蘸取脓汁于灭菌试管中。未破的脓肿，水疱液，水肿液等无菌注射器吸取，注入无菌容器中。尸体剖检后胸水，心包液，关节囊液等可用灭菌吸管吸取，置于灭菌容器中（三）粪便的采集以清洁玻棒挑取新鲜粪便少许（约1克）或用棉拭子自直肠内掏取，置于小瓶内。（四）肠管的采集用线扎紧一段肠管（约6厘米）两端，结外剪下置于灭菌容器中。（五）胆汁的采集整个胆囊置于塑料袋中或以无菌注射器吸取胆汁于灭菌容器中。（六）脑和脊髓的采集采取脑，脊髓于适当保存液中，或将整个头割下，包于锓过0.1%升汞的纱布中，于木箱中送检。（七）实质脏器的采集第2页共12页第1页共12页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共12页选择典型病变连同一部分正常组织，切下一，二块，每块不小于4厘米*2厘米*2厘米。（八）鱼体表、鳃表面的采集(二)病原菌的分离和培养一、实验目的：（1）掌握无菌操作的概念和基本操作技术。（2）了解细菌常用培养基以及培养条件（3）了解平板划线分离菌种的原理和操作要点二、实验原理：微生物的接种技术是微生物学研究中的一项最基本的操作技术。在微生物学的科学试验及发酵生产中，都要把一种微生物移接到另一灭过菌的新鲜培养基中，使其生长繁殖并获得代谢产物。根据不同的接种方法，如斜面接种、液体接种、平板接种、穿刺接种等。接种方法不同，常有不同的接种工具，如接种针、接种环、接种钩、滴管、移液管、涂布器等。接种的菌种都是纯培养的微生物，为了解保纯种不被杂种菌污染，在接种过程中必须进行严格的无菌操作。三、实验材料：烧杯、玻璃棒、天平、电炉、培养基、蒸馏水、接种环、培养皿（12个）、试管（20支）、高压灭菌锅、无菌操作台、酒精灯、温箱四、实验步骤：1、配制培养基：用天平称取琼脂培养基粉末45克，加入100毫升的蒸馏水，用电炉加热直至培养基彻底溶解。2、分装试管：将溶解的培养基分装入试管，且分装入的培养基应不超过试管高度的三分之一，塞上木塞。3、灭菌：将装入培养基的试管、培养基与培养皿用报纸包扎好，一起放入高压灭菌锅，126度灭菌15分钟，等冷却后将试管斜放，制成斜面（斜面长度不超过试管长的一半）。4、制平板培养基：将灭完菌的培养皿与培养基移至无菌操作台，在无菌条件下制成平板培养基，待用。5、取菌种：（1）每个试管中放入1毫升的生理盐水。分成三组。（2）用接种环取鱼鳃、身体与尾部的细菌，分别放于1号试管中。（3）1号试管取一半带菌液体放入2号试管中，振荡，再取一半带菌液体加入3号试管，振荡，取一半液体加入4号试管，振荡。6、分离细菌：（1）在无菌条件下操作，点燃酒精灯后，左手持皿，...
