第18讲微生物的利用和生物技术在食品加工中的应用考点考试内容考试要求微生物的利用1.大肠杆菌的培养和分离实验与探究能力2.分离以尿素为氮源的微生物生物技术在食品加工中的应用1.果酒及果醋的制作实验与探究能力2.泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定微生物的利用1．大肠杆菌的培养和分离(1)大肠杆菌的性质与作用：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，是基因工程技术中被广泛采用的工具。(2)大肠杆菌的扩大培养与分离：用LB液体培养基扩大培养，再在LB固体平面培养基上划线分离，培养后形成一个个单独的菌落。(3)细菌的培养和分离①划线分离法：方法简单。②涂布分离法：单菌落易分开，但操作复杂。(4)培养和分离步骤培养基灭菌→倒平板→培养液培养→划线分离→培养单菌落―→保存。2．分离以尿素为氮源的微生物(1)实验原理：利用尿素的细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。其反应式为(NH2)2C===O＋H2O――→2NH3＋CO2，生成的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由红黄色变成红色。(2)实验步骤：制备培养基→制备细菌悬液→涂布分离法分离→培养和观察。(3)预测本实验的结果：LB全营养固体培养基上的菌落多而杂；尿素固体培养基上的菌落少而纯；一定时间内，菌落周围出现红色区域。用浓度为10－4和10－5土壤稀释液接种，更容易形成单菌落的是10－5土壤稀释液。3．构建微生物的培养与应用网络4．有关微生物实验的基本方法(1)制备培养基：计算→称量→融化→灭菌→倒平板。(2)无菌技术：主要指消毒和灭菌。(3)倒平板操作：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。(4)划线分离操作：划线分离是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(5)涂布分离法：先将菌液进行一系列梯度稀释后，分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。如图：(2018·浙江11月选考)回答与微生物培养及应用有关的问题：(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从____________________时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用________方式可较快地进行过滤灭菌。(2)与酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加__________________的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是________________________________________________________________________。(3)为筛选胞外α淀粉酶分泌型菌种，一般从__________(A.果园树下B．肉类加工厂周围C．米酒厂周围D．枯树周围)获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个________________________比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取________用于检测酶活性。[答案](1)达到设定的温度和压力值抽滤(2)将淀粉分解成小分子糖作为碳源(3)C水解圈直径与菌落直径上清液微生物纯化培养的方法(1)划线分离法(2)涂布分离法：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。如图所示：[题组突破]1．(2019·高考江苏卷)下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是()A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：选A。培养微生物的培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，微生物的接种工具，如接种针、接种环或其他金属用具一般通过酒精灯火焰灼烧来灭菌，A错误。接种前，接种环要在酒精灯火焰上进行灼烧，防止接种环上附着的微生物对实验结果造成干扰，接种后灼烧可以防止微生物扩散，对人造成危害，B正确。接种后的培养皿要倒置，防止冷凝水落入培养基造成污染，C正确。在固体培养基表面可形成单菌落，...
