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第1页共11页HPLC色谱常见问题1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留时间不重现,为什么?6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?7.色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗?9.使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题?10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些?11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉?16.为何出现鬼峰?17.为何出现峰拖尾?18.为何出现峰展宽?19.除了流速外,还有哪些因素能引起压力改变?20.什么是强溶剂、弱溶剂?21.怎样才会使峰位发生重排?22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些?23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些?24.什么是时间常数?25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰?26.为何会出现“胖”峰和平头峰?怎样避免?27.什么是次级保留效应?28.前延峰的发生及处理?29.峰变宽的原因?30.柱平衡慢的常见原因有哪些?31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些?32.管子切割与安装注意事项?33.什么是HPLC的“无限直径效应”?34.如何评价一台检测器?35.如何简单判断比例阀是否内漏?1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?关于漂移问题:①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定②流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定第2页共11页②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。③流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?①筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。②存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载,减少进样量。3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足,解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。调整衰减即可。⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。⑨流动相流量不合适。调整流速即可。⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。4.做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?①泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效,更换比例阀即可;③泵密封垫损坏,更换密封垫即可;④溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;⑤系统检漏,找出漏点,密封即可;⑥梯度洗脱,这时压力波动是正常的。5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留时间不能重现,为什么?这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。如分离情况可以,系统稳定,达到系统适用性要求,就不必保留时间的重现。6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。①拆去保护预柱,...

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