高中生物 实验13DNA片段的PCR扩增辅导教案 浙科版VIP免费

辅导教案导学诱思DAOXUEYOUSI一、PCR技术1．PCR的全称是：____________。2．PCR技术是用于DNA片段复制、扩增的生化技术。3．PCR技术用途：除用于基因扩增外，还用于____________。4．PCR技术的具体应用：在法学、医学、食品和考古学上也是重要的实用工具，如______鉴定、______鉴定、食品质量的确定、______病诊断、肿瘤病和其他疾病的诊断以及考古中人种的确定等。答案：1.聚合酶链反应3．测定DNA序列4．亲子犯罪遗传二、DNA的体内自我复制与PCR技术DNA聚合酶在有________的存在时，利用4种____________，可从____末端向____末端合成新链。PCR技术还需要____________________作为________________，这一段叫______。答案：DNA模板脱氧核苷三磷酸5′3′与DNA模板互补的一段单链DNA聚合酶作用的起点引物三、PCR作用的过程1．1个循环的操作：步骤具体操作双链DNA____将双链DNA加热至____℃，DNA____，DNA之间的______打开，双链分离(也叫做______)续表步骤具体操作与______结合双链分离后，将温度____________℃，这一降温过程叫______。退火后，引物可与2个____________分别结合DNA新链的____________℃下，聚合酶可利用________组装模板的互补链，从引物延伸至____末端2.一般大约需要重复上述3步骤______个循环。3．结果：一个循环形成____个双链DNA，在20个循环后(大约1h),1个DNA片段可扩增上百万个拷贝，30个循环可产生10亿个拷贝。答案：1.分开95变性氢键解链引物迅速降至40～60退火单链的DNA模板延伸724种dNTP3′2．15～303．2四、实验操作1．设备、用品(略)2．材料：凝胶、DNA标样、PCR试剂盒、TBE缓冲液、0.1%亚甲蓝3.步骤：文字说明：取3个0.5mL微量离心管，分别记做1、2、3号。用取样器按表一加入试剂，关闭上盖并在振荡器上振荡20s，使之混合均匀↓将3个微量离心管放在固定器上，保证每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的时间依次放入3个水浴进行PCR↓将TBE缓冲液加入到电泳槽中，使缓冲液高出凝胶面3~4mm，再将样品加入凝胶板的加样孔中。所加顺序内容依次为：凝胶板中的加样情况说明表加样孔编号（对应右图所示）1234离心管中样品标号SA1A2A3所加样品1号样品20微升DNA标准溶液PCR产物1（72℃1min后得到的）PCR产物2（72℃1min、70℃2min后得到的）对照组产物2号样品2微升蓝色缓冲液1号样品与2号样品必须充分混匀后再加入↓开始进行电泳，若用18V电池的电泳4～6h；若甲直流电泳仪电源，80V可电泳40min↓电泳后将凝胶缓冲液倒出，缓冲液可再利用。将10mL染色剂（亚甲蓝）覆盖在凝胶表面，15~20min后移去（可再利用），再加入5mL70%乙醇，不断摇动1~2min，使其分布均匀，再除去，加入冷水，几分钟后看到蓝色的区带出现，这就是扩增的DNA↓比较、判断胶片结果图表辅助：表一：试剂1号管(12个循环)2号管(14个循环)3号管(对照)PCR混合液2020—蒸馏水——20引物202020模板DNA101010总体积505050↓表二：时间温度目的2min30s30s1min2min95℃95℃49℃72℃70℃开始变性(解链)最后扩增↓↓↓胶片染色结果核心解读HEXINJIEDU1．为什么DNA复制需要引物？DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基末端称为3′端，而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。DNA复制方向的示意图2.细胞内参与DNA复制的各种组成成分和作用是怎样的？参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶打开DNA双链DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链引物使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸3.细胞内的DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)相同吗？两者又有什么关联呢？细胞内的DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)是不同的，两者具体比较见下表：细胞内DNA复制PCR不同点解旋有解旋酶的参与，边解旋边复制80～100℃高度解旋，双链完全分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA能量ATP不加温度体内温和...