细胞生物学研究对象与任务VIP免费

第1页共49页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共49页第一章绪论第一节细胞生物学研究对象与任务细胞生物学（CellBiology）及其研究的主要内容：生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系，而细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有了细胞才有完整的生命活动。细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它是在不同层次（显微、亚显微与分子水平）上以研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、真核细胞基因表达与调控、细胞起源与进化等为主要内容。细胞生物学研究的主要内容有：细胞结构与功能、细胞重要生命活动：细胞核、染色体以及基因表达的研究细胞膜与细胞器的研究细胞骨架系统的研究细胞增殖及其调空细胞分化及其调控细胞的衰老与凋亡细胞的起源与进化细胞工程第二节细胞生物学发展简史一、细胞的发现和细胞学说的建立二、经典细胞学发展阶段三、实验细胞学发展阶段四、分子生物学发展阶段第三节医学细胞生物学在医学教育中的地位一、医学细胞生物学是医学科学的重要理论基础之一二、细胞生物学和医学的发展相互影响，相互促进。第四节细胞生物学常用的研究技术和方法一、细胞形态结构观察的技术和方法（一）细胞显微结构研究的技术与方法1.普通复式光学显微镜技术⑴光镜样本制作⑵分辨率是指区分开两个质点间的最小距离2.荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）◆原理◆应用：⑴直接荧光标记技术⑵间接免疫荧光标记技术⑶在光镜水平用于特异蛋白质等生物大分子的定性定位：如绿色荧光蛋白(GFP)的应用3.激光共焦扫描显微镜技术（LaserConfocalMicroscopy）◆原理◆应用：排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率(1.4—1.7)，可第2页共49页第1页共49页利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜可见光（400-700）紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）200nm100nmLMFMEM成像原理真空透镜光源分辨本领显微镜编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共49页重构样品的三维结构。4.相差显微镜（phase-contrastmicroscope）将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞5.微分干涉显微镜（differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC）明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器6.录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动（二）细胞超微结构研究的技术与方法1.透射电子显微镜的基本知识电镜与光镜的比较电镜与光镜光路图比较电子显微镜的基本构造2.主要电镜制样技术⑴负染色技术负染色技术（Negativestaining）与金属投影染色背景，衬托出样品的精细结构⑵冰冻蚀刻技术冰冻蚀刻技术（Freezeetching）（技术示意图）冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构。快速冷冻深度蚀刻技术（quickfreezedeepetching）⑶超薄切片技术超薄切片技术用于电镜观察的样本制备示意图⑷电镜三维重构技术电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（StructuralBiology）——主要研究生物大分子空间结构及其相互关系——的主要实验手段。3.扫描电镜（Scanningelectronmicroscope，SEM）电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成象。CO2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张力问题。1.免疫荧光技术：快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限⑴蛋白电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹反应(Western-Blot)⑵免疫电镜技术：第3页共49页第2页共49页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共49页2.免疫铁蛋白技术3.免疫酶标技术4.免疫胶体金技术应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架...