强化练(2)1
(2019吉林长春质量检测)细胞色素P450酶在萜类天然产物的合成过程中起重要(羟基化)作用,自然条件下细胞色素P450酶与其伴侣蛋白CPR(为P450酶传递电子)在细胞内分别表达,催化效率较低
研究人员推测,若将P450酶与CPR通过一段linker(3~9个氨基酸组成的柔性肽链)融合表达成一个蛋白(如图),催化效率会有不同程度的提高
请回答:(1)首先从预期融合蛋白的功能出发,设计预期融合蛋白的结构,推测其,设计相应的
融合蛋白的表达顺序为CPR-linker-P450,设计时应将CPR基因的删除,保证融合蛋白基因连续表达
(2)欲进一步探究linker长度对P450酶催化效率的影响,简述基本实验思路:,本实验还应设置的对照组是
(3)PCR技术扩增融合蛋白基因时,所遵循的原理是,将模板DNA加热至90~95℃的目的是
答案(1)应有的氨基酸序列脱氧核苷酸序列终止子(2)设计不同长度的linker,探究其对P450酶催化效率的影响不加linker测定P450酶的催化效率(3)DNA双链复制使DNA变性解析(1)根据蛋白质工程的基本原理,改造和合成蛋白质时,首先从预期融合蛋白的功能出发,设计预期的融合蛋白的结构,推测其应有的氨基酸序列,设计相应的脱氧核苷酸序列
为了使融合蛋白按照CPR-linker-P450的顺序表达,设计时应将CPR基因的终止子删除,保证融合蛋白基因连续表达
(2)根据实验目的可知,实验的自变量为linker的长度,需设计不同长度的linker,探究其对P450酶催化效率的影响,并以不加linker时P450酶的催化效率为对照组进行探究
(3)PCR技术的原理是DNA双链复制,在扩增融合蛋白基因时,将模板DNA加热至90~95℃的目的是使DNA分子变性解链为单链,使引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶的作用下,进行延伸,如此重