基因工程与细胞工程1．(2015·江苏两市一模)为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切点如图一所示。则用____________和________酶处理两个基因后，可得到_____端与_____端(填图中字母)相连的融合基因。(2)将上述融合基因插入图二所示Ti质粒的TDNA中，构建____________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是______________________________，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过________________技术，可培育成转基因油菜植株。(4)用____________法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。解析：(1)由题中“已知序列设计引物”可想到PCR扩增DNA的做法。由图示中酶D基因和转运肽基因都有ClaⅠ酶切位点，想到用ClaⅠ酶酶切后，酶D基因的A端和转运肽基因的D端可用DNA连接酶将其连成融合基因。(2)将融合基因插入Ti质粒可形成重组质粒或者基因表达载体。由Ti质粒上具有四环素抗性基因，所以想到在培养基上添加四环素以实现目的基因的筛选和鉴定。(3)油菜的叶片放入侵染液中一段时间后能筛选获得转基因油菜，说明侵染液中有农杆菌，用农杆菌转化法将融合基因导入油菜细胞中。转基因油菜细胞培育为转基因油菜植株，用植物组织培养技术。(4)检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达，即检查转基因油菜中是否合成了融合基因相应蛋白，所以用抗原—抗体杂交技术。答案：(1)PCRClaⅠDNA连接AD(2)基因表达载体(或“重组质粒”)四环素(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞植物组织培养(4)抗原—抗体杂交2．(2015·宁夏银川三模)转基因抗虫棉是人们应用较早的基因重组技术推广项目，目前转基因技术有了新的改进，如下图所示，请根据所学知识回答：(1)图中转基因过程通常选择的限制酶是____________________，启动子的作用是与________________识别和结合，从而驱动基因的转录过程。目的基因与载体结合主要依靠二者含有共同的________________。(2)需要进行离体组织培养的过程是________(用标号)。由棉株1获得单倍体苗的途径为：花粉通过诱导首先形成________进而再分化为试管苗。一般试管苗的形成，先诱导生成________(“丛芽”或“根”)，说明原因________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)棉株1、2、3中各随机取出一个叶肉细胞，其细胞核中含有的目的基因个数分别为________。解析：(1)分析图示可知，目的基因的两侧以及质粒上都有EcoRⅠ和BamHⅠ限制酶的识别位点，所以图中转基因过程通常选择的限制酶是EcoRⅠ和BamHⅠ。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，所以启动子的作用是与RNA聚合酶识别和结合，从而驱动基因的转录过程。目的基因与载体结合主要依靠二者含有共同的黏性末端。(2)由棉株1获得单倍体苗的①过程为花药离体培养，需要用到植物组织培养技术，由受体细胞培养成棉株2的③过程也需用到植物组织培养技术，所以需要进行离体组织培养的过程是①和③。棉株1的花粉通过诱导首先形成愈伤组织进而再分化为试管苗。试管苗的形成，一般先诱导其生成丛芽，有利于进行光合作用合成有机物，进而利于生长。(3)图示显示目的基因导入的受体细胞来源于单倍体幼苗，由受体细胞通过③过程培养成的棉株2为单倍体，由棉株2通过④过程培养成棉株3，需要人工诱导染色体加倍，目的基因也随之加倍，所以，棉株1、2、3中各随机取出一个叶肉细胞，其细胞核中含有的目的基因个数分别为0、1、2。答案：(1)EcoRⅠ和BamHⅠRNA聚合酶黏性末端(2)①和③愈伤组织丛芽进行光合作用合成有机物，利于生长(3)0、1、23．(2015·山东文登二模)下面是科学家利用现代...
