氨茶碱的血药浓度测定试验报告VIP免费

氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算一、【目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分离出茶碱。在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出（见图1）。测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度）。茶碱的吸收度为△A=A274A298，使用UV1601双波长分光光度计测定（见图2）。取血试管酸性分离管碱性分离管NaOH含茶碱的上层液血液血清抽提液图1．茶碱的抽提过程图2氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型，公式为C=Ae-t+Be-t，曲线由分布相Ca=Ae-t和消除相Cb=Be-αβαβt两部分组成，其对数表达式分别为logCa=(-αloge)t+logA和logCb=(-βloge)t+logB（见图3），在对数坐标上由于分布相较早趋近于零，故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消除相对数表达式logCb=(-βloge)t+logB，然后用差数法求出Ca=C-Cb，再次运用直线回归法求出分布相对数表达式logCa=(-αloge)t+logA，最终得到所有的参数A、α、B和β，从而得到时量曲线C=Ae-t+Be-t。αβ1分布相logCr=(-αloge)t+logALogB消除相logCex=(-βloge)t+logB图3．二房室模型的时量曲线三、器材：玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。药品与试剂：氨茶碱标准液，0.1NHCl，0.1NNaOH，异丙醇：氯仿抽提液(5：95)。动物：家兔，体重2.5～3kg。四、【方法步骤】1．动物实验：给药、不同时段取血，测定一系列血药光密度（ΔAt）取健康家兔一只，用二甲苯涂擦兔耳以扩张血管，静脉注射肝素750IU/kg抗凝，取空白血约0.5ml。经4min后一耳缘静脉注射氨茶碱(2分钟内注射完)，另一耳缘静脉在不同时段取血，取血时间（x）如表2。2500转/分离心5分钟分离血清，各管均取血清0.25ml于试管中，加0.1N盐酸溶液0.1ml、抽提液2.5ml，振摇混合，2500转/分离心10分钟，吸取氯仿液(下层)2ml置另一试管中，加入0.1NNaOH溶液2ml，振摇混匀，2500转/分离心10分钟，吸取碱液(上层)，以空白血为参比，测定一系列ΔAt，结果填入表2的第一和第二列。操作流程如图4：图4．ΔAt操作流程22.标准管加样取试管5支，依次加入0.1mg/ml的茶碱标准液20、40、60、80和100l，然后各管加入0.1NNaOH溶液使总容积为4ml，则浓度依次为0.5、l.0、l.5、2.0、2.5g/ml，测定各管△A，填入表1。五、【数据处理】（1）利用Excel求药物光密度（Y）与浓度（X）之间的回归关系Y=A’+B’X表１．标准管加样标准管号茶碱标准液(ml)0.1NNaOH溶液（ml）茶碱浓度X（g/ml）光密度Y（△A）回归方程10.023.980.50.03920.043.961.00.07730.063.941.50.11640.083.922.00.16050.103.92.50.198Y=0.0802X-0.0023Excel模板已经做好，仅需要在标准直线工作表中的第二列填入相应的△A值，Excel便自动绘出茶碱光密度——浓度回归直线（见图5），并标明其表达式Y=A’+B’X，给出相应的统计参数截距A’=-0.002、斜率B’=0.080和相关系数R’=1.000。图5（2）计算不同时段血药浓度，求时量曲线C=Ae-t+Be-t及药动参数αβ不同时间点x(min)及其相应血药光密度（ΔAt）已经填入了表2的第一和第二列，在Excel模板“血药浓度计算”工作表中已预先拷入了表2，则相应血药浓度Ct(μg/ml)和血3药浓度对数值y自动在第三和第四列求出血药浓度和二房室模型的药动参数，有以下几步：表2．不同时段血药光密度（ΔAt）记录x(min)132240852443720.1090.0940.0780.0610.0500.041ΔAtCt(g/ml)Ct=(ΔAt-A')/B'*4/0.227.7624.0120.0215.7913.0410.80y(logC)y=LOG10(Ct)1.4431.3801.3021.1981.1151.0331）利用回归直线表达式计算每个ΔAt相应的血...