甘油三酯TG酶法GPOPOD法作业指导书1、前言试验名称：甘油三酯测定，英文名称：TG，方法：GPO－POD法。本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB-450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的甘油三酯浓度，以保证测定结果的准确可靠。本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中甘油三酯的浓度。甘油三酯为人体重要的能源物质，可以从食物中吸取，或由碳水化合物在体内合成，多数学者认为高甘油三酯血症为心血管疾病的危险因素，临床上甘油三酯的定量测定是血脂分析的重要指标，血清中甘油三酯的含量随年龄增长面有上升的趋势，尤其是体重超过标准的中年以上年龄的人往往偏高，原发性或继发性高脂蛋白血症，动脉粥样硬化、糖尿病以及肾病综合症，可见血清甘油三酯含量增高。而原发性β脂蛋白缺乏症，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质机能减退，以及消化吸收不良等，则血清甘油三酯含量降低。2、测定原理本试验反应原理如下：甘油三酯＋H2O甘油＋脂肪酸甘油激酶甘油＋ATP甘油-3-磷酸＋ADP甘油磷酸氧酶甘油-3-磷酸＋O2DAP＋H2O2PODH2O2＋DHBS＋4-氨基安替比林醌亚胺色素＋H2O在上述反应中，经色醌亚胺色的生成量与样本中甘油三酯的浓度成正比，通过在520nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中甘油三酯的浓度。注：DAP磷酸二羟丙酮DHBS3,5-二氯-2-羟基苯磺酸盐POD过氧化物酶3、试剂试剂生产商：长海科华公司。剂型：液体双试剂。包装量：R1：4*50mlR2：2*25ml注册号：沪食药监械（准）字2013第2401879号。生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。基本成份：试剂1ATP0.70mmol/lEDTA10mmol/l脂酶DHBS1.88mmol/lMg+12.5mmol/l甘油激酶≥1250u/l甘油磷酯氧化酶≥5000u/l脂酶≥1250u/l缓冲液100mmol/l试剂24-氨基安替比林2.0mmol/l过氧化物酶≥750u/lEDTA2.0mmol/l缓冲液100mol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。启用后在2――10℃可稳定14天，若试剂混浊，或空白在520nm下吸光度值高于0.3A时，则不能使用。4、标准品：使用试剂盒附带标准品5、质控品：生产商：英国Randox公司。剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶，完全溶解30分钟后使用。保存条件：未溶解时2―8℃稳定至有效期，复溶后2―8℃稳定一周。6、、样品要求：样品采集前病人宜清淡饮食，禁酒至少三天以上，空腹用肝素锂抗凝管或促凝管常规方法肘静脉采血，血标本4000转离心3分钟，分离新鲜血清或血浆样品，注意标本采集前禁食要达到10－14个小时，均应不溶血，采血管应避免使用甘油成分润滑的物品。血清或血浆样品中的甘油三酯2－8℃可稳定3天。-20℃冷冻标本可稳定数周。室温保存样品测定值偏高。样品拒收标准遵照《安阳鼎城糖尿病医院标本收集管理制度》要求执行。7、质控品分析要求：每批分析需做高、低两个值。失控范围和失控后处理遵照《安阳鼎城糖尿病医院检验科室内质控操作规范》的规定设置。质控品分析操作见上述标准化操作规程。8、校准品分析要求校准操作见标准化操作规程。9、设备设备生产商：上海科华公司设备型号：KHB-45010、上机测定参数：见试剂说明书11、操作步骤：见全自动生化分析仪标准化操作规程12、计算方法甘油三酯浓度（mmol/l）=样本管吸光度/校准管吸光度*校准液浓度（mmol/l）。13、技术参数：可测定范围：0.05－11.3mmol/l试剂空白起始吸光度：≦0.30A(540nm37℃)。相对偏差：≦±10%批内精密度：CV%≦6%批间精密度：相对极差（%）≦6%14、参考范围：0.45—1.71mmol/l15、报告方式：mmol/l16、注意事项：a、样本中甘油三酯浓度大于10mmol/l时，可用生理盐水稀释，计算结果时乘以稀释倍数。b、本方法不能消除游离甘油的影响。c、试剂中含有防腐剂和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水清洗。请勿吞服。d、反应显色可稳定1小时。17、替代方法：如因特殊情况本试验不能正常测定，在征得患者同意后，用同样试剂、方法在外院有同类设备测定。
