HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量VIP免费

HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量【摘要】目的：建立HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法：色谱柱为Welch-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（52∶48），流速为1.0ml/min，检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯为254nm。结果：穿心莲内酯在2.55～51μg范围内线性关系良好，r=0.9999；脱水穿心莲内酯在2.662～53.24μg范围内线性关系良好，r=0.9999。穿心莲内酯平均回收率分别为97.9%，RSD=1.16%；脱水穿心莲内酯平均回收率100.13%、RSD=1.86%。结论：此法重复性好、灵敏度高、定量准确，可作为该复方双花颗粒质量控制指标之一。【关键词】复方双花颗粒；穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯；HPLC【中图分类号】R284.1【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2016）09-0030-02复方双花颗粒主要由金银花，板蓝根，连翘和穿心莲四味药组成，具有清热解毒，利咽消肿的功效。其中，穿心莲具有清热解毒、凉血、消肿功效[1]，主要有效成分为穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯等二萜内酯类成分。2010年版《中国药典》一部“穿心莲”药材以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量作为质量控制指标。研究复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯两者总含量的检测方法，为其质量控制提供实验基础。1仪器与材料1.1仪器岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪（SPD-M20A检测器，LC-Solution色谱工作站）；Waters2695型高效液相色谱仪（Waters2487检测器，Waters-Solution色谱工作站）；BSA224S型电子分析天平；SartoriusCPA225D电子分析天平；数显恒温水浴锅。1.2材料穿心莲内酯（批号：110854-200306）、脱水穿心莲内酯（批号：110797-200307）购于中国药品生物制品检定研究院；复方双花颗粒（批号：141201、141202、111102、111101）。甲醇为色谱纯（美国TEDIA公司）；水为超纯水；其他所用试剂均为分析纯。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱：Welch-C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（52∶48）；流速：1.0ml/min，检测波长[2]：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯为254nm；柱温：25℃；进样量：20μl。理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于3000，脱水穿心莲内酯峰计不低于2500。2.2供试品溶液的制备取装量差异下本品研细，取约1.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，90℃水浴加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加于中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径为1.5cm）上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置于50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.3线性关系考察精密称取穿心莲内酯对照品适量加甲醇超声溶解，制成每1ml含2.55、5.1、10.2、12.75、25.5、51μg的系列标准溶液；另精密称取脱水穿心莲内酯对照品适量加甲醇超声溶解，制成每1ml含2.66、5.32、10.64、13.31、26.62、53.24μg的系列标准溶液。分别精密吸取上述系列标准溶液20μl，注入液相色谱仪，以对照品的浓度为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得穿心莲内酯回归方程：Y=43662X+1753.3，r=0.9999，线性范围为2.55～51μg；脱水穿心莲内酯回归方程：Y=28283X-2757.8，r=0.9999，线性范围为2.66～53.24μg。2.4精密度试验精密吸取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液进样6次，进样20μl，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积，计算其RSD值，分别为0.2%、0.3%，表明仪器精密度良好。2.5重复性试验取批号为141201供试品6份，平行制成供试品溶液，测得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总含量为1.41mg/g，RSD为1.50%，表明本方法重复性良好。2.6回收率试验取同一批已知含量（批号：141201，穿心莲内酯含量为0.959mg/g，脱水穿心莲内酯含量为0.454mg/g）样品粉末0.5g，平行6份，分别精密加入穿心莲内酯（0.0204mg/g）和脱水穿心莲内酯（0.0106mg/g）混合对照品溶液25ml，同法制成加样供试品溶液，测定并计算，穿心莲内酯平均回收率为97.9%，RSD为1.16%；脱水穿心莲内酯平均回收率100.13%、RSD为1.86%，表明回收率试验良好。2.7专属性取处方中穿心莲以外的药材，按处方工艺，制得阴性对照溶液。按...