HIV抗体初筛试验讲述VIP专享VIP免费

HIV抗体筛查试验山西医科大学第二医院检验科郭先锋第一页，共三十三页。HIV抗体检测的目的和要点目的诊断血液筛查监测要点根据目的选择检测方法及检测策略!严格遵守实验室SOP筛查试验阳性—需做确证试验筛查试验阴性—不应做确认试验筛查及确证试验均应做好咨询工作第二页，共三十三页。HIV抗体筛查试验试剂储存温度效期样品血清血浆全血方法酶联免疫吸附试验（ELISA化学发光或免疫荧光实验快速检测(RT)及其它检测试验明胶颗粒凝集试验（PA）免疫渗滤试验免疫层析试验免疫胶体金法（硒）第三页，共三十三页。免疫胶体金法阴性质控区（C）出现红色反应线阳性质控区（C）出现红色反应线检测区（T）出现红色反应线无效质控区（C）未出现红色反应线HIV抗体筛查试验第四页，共三十三页。HIV抗体筛查试验酶联免疫吸附试验（ELISA）方法类型双抗原夹心法测抗体双抗体夹心法测抗原捕获法测抗体间接法测抗体竞争法测抗原\抗体第五页，共三十三页。用于检测HIV抗体的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。第二代：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，特异性高于第一代试剂。第六页，共三十三页。用于检测HIV抗体的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原夹心法原理检测HIV抗体。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1IgG、IgM、IgA抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。高纯度的HIV-1/-2型抗原待检抗体酶标记的HIV-1/-2型抗原第七页，共三十三页。用于检测HIV抗体的ELISA法第四代此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对P24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体，可同时检测HIV-1IgG、IgM、IgA抗体和P24抗原。增加了敏感性和特异性第八页，共三十三页。检测HIV抗体的ELISA试剂试剂种类必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准，批批检合格的HIV抗体检测试剂使用在有效期内且保存条件符合要求的试剂存放试剂的冰箱温度2-8℃，使用前要放置室温平衡第九页，共三十三页。检测HIV抗体的ELISA试剂完整的ELISA试剂盒包含以下各组分已包被抗原或抗体的固相载体酶标记的抗原或抗体酶的底物阴性对照品和阳性对照品定性测定标本（和结合物）的稀释液洗涤液酶反应终止液第十页，共三十三页。ELISA检测试剂固相载体固相载体材质聚苯乙烯固相载体形状微量滴定板第十一页，共三十三页。检测HIV抗体的ELISA试剂结合物（酶标记的抗体或抗原）辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)底物四甲基联苯胺(TMB)反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm第十二页，共三十三页。检测HIV抗体的ELISA试剂洗涤液常用含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水终止液HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸第十三页，共三十三页。ELISA试验标本的采取和保存加样孵育洗涤显色与终止酶标仪测定第十四页，共三十三页。标本的采取和保存避免溶血红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色避免污染血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应保存一周内2～8℃一周以上-20℃第十五页，共三十三页。标本送检信息姓名外螺旋盖（带胶垫）血清管第十六页，共三十三页。√×第十七页，共三十三页。接收样本时，必须填写样本接收记录单建立样本的唯一性编码登记有关信息受检者姓名、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期样本的接收第十八页，共三十三页。样本的接收认真核对样本与送检单提供的信息是否相符、样本有无破损和渗漏。如发现渗漏的，立即将尚存的样本移出，对样本管及包装进行消毒，同时报告主管领导和有关专家检查样本的物理性状。并做好记录。如果样本不符合试验的要求，应将样本安全废弃，同时立即通知送样人第十九页，共三十三页。样本的接收实验室工作人员...