第四章工业发酵灭菌(1)VIP免费

工业发酵灭菌知识目标理解工业发酵常用灭菌方法的原理和适用范围掌握工业发酵培养基和发酵设备灭菌工艺的选择掌握无菌空气制备的基本知识和典型工艺要求一、热灭菌法1、火焰灭菌法直接在火焰上灼烧灭菌，如接种针和一些金属小工具、试管口、三角瓶口等灭菌采用这种方法，该方法简单有效，但局限性很大。22、干热灭菌法、干热灭菌法进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内微生物体内蛋白质变性蛋白质变性和和电解质浓缩电解质浓缩引起引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般度要高，时间要长，一般160160～～170℃170℃，，11～～1.5h1.5h。。实际应用时，对一些要求保持干燥的实验实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。器具和材料可以采用干热灭菌法。湿热灭菌法湿热灭菌法利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。法。其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。生物死亡。由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热蒸汽存在潜由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热蒸汽存在潜热。热。蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为件为121℃121℃，，30min30min。。湿热灭菌法煮沸灭菌法将要消毒的物品放入水中煮沸（100℃）15～20min，一般微生物的营养细胞都可以杀死，但不能杀死芽孢。巴氏消毒法法国微生物学家、化学家巴斯德首创的低温消毒法。加热到62℃，经过30分钟，以杀死不耐高温的物质中的微生物和病原体的消毒法。牛奶、啤酒、黄酒、酱油和醋等用此法消毒。湿热灭菌法间歇灭菌法反复几次的常压蒸汽灭菌，以达到杀死微生物营养体和芽孢的目的。操作步骤：100℃，30-60min；37℃，1d；同上重复三次…适用于不宜高压灭菌的物质，如糖类明胶牛奶培养基。方法简单，但却麻烦；工作周期长。湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法使用密闭的高压蒸汽灭菌锅，使灭菌锅内蒸汽不外溢，增加压力，由于压力的增高，温度也随之增高，从而提高杀菌力，缩短灭菌时间。最有效而广泛应用的灭菌方法实验室常用的是0.1MPa，121℃，15～30min应用范围培养基，水，发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。高压蒸汽灭菌法的注意事项：1.完全排除锅内冷空气2.灭菌完毕后要缓慢减压3.压力降为零后打开盖子二、辐射灭菌法二、辐射灭菌法利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物以以紫外线紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过过1.2m1.2m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。液体物料的灭菌。三、化学药品灭菌法三、化学药品灭菌法某些化学药品与微生物发生反应（蛋白变某些化学药品与微生物发生反应（蛋白变性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌的作性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌的作用。用。化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。...