HPLC使用基本维护目的•通过本次学习,应达到以下目的•学会HPLC正确的维护方式与方法;•按照规定的维护方式与方法进行维护;•学会色谱柱的正确维护、保存方式;•关注色谱工作站的使用。维护—流路系统•1、溶剂瓶•2、过滤头•3、输液管•4、purge阀过滤芯•5、泵清洗•6、进样针底座•7、氘灯•8、废液管•9、清洁溶剂瓶•1、溶剂瓶在盛装溶液前必需确干净,装有机溶剂的需要保证无水,装正相流动相的需要进行干燥处理。•—不干净的瓶容易滋生微生物,溶液很快变混,产生颗粒或絮状物。每次换流动相应先清洗溶剂瓶。•2、试剂瓶应用封口膜密封,避免灰尘细菌进入、溶液挥发,溶剂挥发。•3、瓶盖应定期清洗。过滤头•将充满溶剂的管路提起,溶剂应很快滴落,如滴下很慢或很少,说明管路堵塞。•玻璃滤头采用35%硝酸浸泡2小时或者在通风橱中煮沸30分钟,然后纯水冲洗干净。不得超声清洗。•不锈钢滤头可超声清洗,不得酸洗。输液管•细菌,不溶性颗粒及其他污染物会粘附在管壁上,导致输液不畅通。•乙腈会聚合尤其是见光条件下。•—每个月应用60~80℃的热水冲洗2小时后再用异丙醇低流速冲洗过夜。•含有盐的流路必须放在A/D路,B/C放置有机溶剂;•流路应经常更换,例如盐、水互换,乙腈与其它互换。•每3~6个月将管路拆下来,管路中充满纯化水,置热水中超声清洗。purge阀过滤芯、泵清洗•当打开purge阀,流量设置为5ml/min时,压力超过10bar,说明过滤白头需要更换;•更换后拧上如漏液,应先检查是否上正位置,否则拧下后洗瓶冲洗表面后重新拧紧。•输液泵在往复运动中可能有盐析出,泵在线清洗一直开启可以冲走析出的细微颗粒,保证宝石杆不会划伤。•一般采用10%的异丙醇溶液。每15天必须更换一次。进样针底座•如发现进样针底座上有盐析出:说明有渗漏;(在实际工作中每台仪器多少都会有盐析出的)为减少交叉污染,出现鬼峰、怪峰,应定期检查、清洗进样针底座•进样针弯、有毛刺、或钝应更换。•清洗和更换应按照正确的流程操作,过程中确保自动进样器不断电。废液管•废液管不应被挤压,从流通池出来的管路不得随意加长或去除,保证压力正常,否则可能导致峰形异常或流通池破裂。•废液管连接到废液钢管接口,应定期检查是否密封或正确连接。工作站软件•1、不得随意更改系统IP地址;•2、不得删除软件内的任何文件;•3、不得删除产生的数据文件。•4、不得随意修改系统时间。色谱柱(1)•对于C18柱/C8柱•1、使用完毕的色谱柱应两端使用盖帽密封;•2、短时间不使用,可以保存在纯的甲醇(乙腈)中,最好保存在乙腈中;•3、使用完毕,长时间不使用应保存在纯的乙腈中,但是每3个月需要使用20~30倍柱体积的乙腈进行置换;•4、不得保存在纯水中或缓冲盐中;•5、不得使用纯水冲洗色谱柱,初始比例可以是水和乙腈(甲醇)比例9:1。色谱柱(2)•其它常见色谱柱包括:•手性色谱柱•苯基柱•氨基柱•阴(阳)离子交换柱•使用前应仔细阅读说明书,根据要求使用和维护保养。氘灯流通池维护•流通池进行清洗安装后应进行波长校正;•氘灯更换后应进行使用时间重置,•进行波长校正工作,•进行光能量测试,•进行光电流测试;•定期检查光强度。