VYSIS说明书试验程序原理21黄Y黄X绿在原位杂交X绿光探针centromerregion是一种在一个细胞标本里能看见特定的核酸序列(尤其是DNA)的技术，(FISH)包括精确的单股荧光标记DNA探针的退火与目的基因互补.探针荧光的DNA位点能通过直接的检测用荧光显微镜看到。羊水标本包括间期细胞用标准的细胞遗传学方法附着在玻片上。样本标本DNA变性，然后与CEPx/yandLSI21探针杂交。在杂交后，多余的和未结合的探针被一系列洗涤所除掉。染色体和核DNA用特殊的染料被复染，复染剂DAP发蓝光.用装上适合的激动剂与发射滤器的荧光显微镜观察CEPX/Y和LSI21DNA探针杂交，能看到强烈的橘黄光和绿色的荧光信号和蓝色的复染核。通过显微镜检查21X,andY染色体点计，荧光染色区域明亮地突出于核的DNA普通的蓝色荧光(通过DAPI复染).FISH程序能使核的21,X,andY染色体点计可见。CEPX/YDNA探针是一种绿光和橘黄光混合物，直接标记荧光的DNA探针，分别在X和Y染色体的DXZ1和DYZ3区。LSI21DNA探针是一种橘黄色光直接标记的荧光DNA探针，包含特异性DNA序列对应位于21号染色体21q22.13到21q22.2区的D21S259和D21S342基因座.所有探针混合物都在杂交缓冲液中经过了预变性以便于应用。本试验设计目的是用荧光原位杂交法探测和量化21,X,andY染色体。试剂和仪器提供的材料本试剂盒包括四种试剂，够约20次测试。成分组成容量储藏LSI21DNA探针:E.coli大肠杆菌质粒(探针经过预变性)橘黄光标记DNA探针与阻断DNA和杂交缓冲液预混合（右旋糖酐硫酸盐,甲酰胺，SSC）200ul/小瓶(10ng/ul)-20℃避光CEPX/YDNA探针(探针经过预变性)绿光荧光标记X探针和橘黄光标记Y探针，与阻断DNA和杂交缓冲液预混合（右旋糖酐硫酸盐,甲酰胺，SSC）200ul/小瓶（15ng/ul－20℃避光DAPIII复染剂125ng/MlDAPI在苯二胺二氢氯化物,,甘油和缓冲液中600ul/1小瓶-20℃避光NP-40去离子去污剂4ml/2小瓶－20到25℃20xSSC氯化钠和柠檬酸钠66g/1包装同上探针对照玻片男性，羊水细胞（正常）固定的生物标本得自正常男性羊水细胞加于玻璃显微镜玻片5片(10靶区)－20℃干燥产前筛查阳性探针对照固定的生物标本得自人成纤维细胞系加5slides（10同上玻片。于玻璃显微镜玻片靶区）储存和处理储存未开封的试剂盒做为一个整体在-20℃避光，避湿.20xSSC应单独储存于室温。储存探针对照玻片在一个密封的容器中在-20℃，应用干燥剂防潮.每一个未开封的试剂盒成分的失效日期标于独立的标签上。这些储存条件适用于所有开封及未开封的组成部分。需要但未提供的材料实验室试剂超纯甲酰胺储存于+4℃至多一个月（从收到起，具体看制造商的建议的详细信息）浓缩盐酸(12N)HCL1N氢氧化钠纯净水(蒸馏或去离子的orMilli-Q).储存于室温中carmoy’s固定剂(3:1甲醇:醋酸)drierite干燥剂1x胰蛋白酶/EDTA(0.05%胰蛋白酶,0.53MmEDTA-4Na于Hanks平衡盐溶液中withoutCacl2,Mgcl2.6H2OandMgSO4-7H2O)0.56%氯化钾实验室器械荧光显微镜（装备建议的滤光器）定相对照光学显微镜预先清洁的显微镜玻片玻片加温器(45℃-50℃)22mmx22mm玻璃盖玻片(1-10ul)微升消毒枪头聚丙烯微离心管(0.5mlor1.5ml)定时器磁力搅拌器涡流微离心机量筒水浴(67±2℃和73±1℃)空气孵化器恒温箱(37℃)菱形头划线器湿室钳子（镊子）无菌注射器(5ml)Coplin缸(6)建议型号:wheaton产品.No.900620垂直染缸PH计和PH试纸校准的温度计金属试管架橡胶粘固剂0.45um孔过滤器显微镜器材和滤光器显微镜:需要epi-照明荧光显微镜观察荧光,应该检查以确定正确操作一台显微镜判断适合的普通DNA染色，如DAPIpropidiumlodide,and阿的平可能不适合FISH,应该常规显微镜清洁和制造商的技术顾问做定期的调整。注意:通常,推测的试剂失败在一次原位试验中可能实际为荧光显微镜功能失常或未达最佳标准或者是应用了不正确的滤光器设置去看一个成功的杂交试验。激发光源:激发灯是激发荧光团为荧光的光源.除非激发灯正确排列，否则最适宜的图象不会产生。对于CEPandLSI探针100瓦的水银灯是建议的激发光源.灯的建议最长使用时间是200小时。记录灯泡的使用小时数，在超过额定的小时数以前更换。物镜:物镜的选择在亮度、分辨度、图象的综合质量上有很大的影响，当使用...
