免疫细胞的分离与检测VIP免费

一、免疫细胞的特征1、免疫细胞的形态学特征理化性状生物学特性2、免疫细胞的膜分子特征CD分子NKcells吞噬溶酶体二、免疫细胞的分离技术二、免疫细胞的分离技术1、密度梯度离心法2、黏附分离法3、荧光激活分离法4、磁性分离法5、其他分离法1、密度梯度离心法聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，亲水性高，平均分子量为400,000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。离心前离心后稀释抗凝血淋巴细胞分离液血浆单个核细胞粒细胞红细胞2、黏附分离法-纯淋巴细胞群的分离贴壁法：贴壁法：将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至皿或扁平小瓶中，移至37℃37℃温箱静置温箱静置1h1h左右，单核细胞左右，单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因因BB细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中BB细胞有细胞有所损失。所损失。2、黏附分离法：淋巴细胞亚群的分离尼龙毛法：尼龙毛法：混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，BB细胞、浆细胞、细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数TT细胞则细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含通过尼龙毛柱，这是获得富含TT细胞群的有效方法。细胞群的有效方法。T细胞得率为20-30%左右。亲和板法：亲和板法：利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞悬液，凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未悬液，凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未吸附的细胞悬液中获取。吸附的细胞悬液中获取。吸附柱法：吸附柱法：将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10SephadexG10的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行，滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行，对细胞极少损害。对细胞极少损害。3、荧光激活分离法（FACS）流式细胞仪44、磁性分离法、磁性分离法（（11）磁铁吸引法：）磁铁吸引法：利用单核细胞具有吞噬的特性，利用单核细胞具有吞噬的特性，在单个核细胞悬液中加直径为在单个核细胞悬液中加直径为3μm3μm的羰基铁颗粒，置的羰基铁颗粒，置37℃37℃温箱内短时旋转摇动，待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后，温箱内短时旋转摇动，待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后，用磁铁将细胞吸至管底，上层液中含较纯的淋巴细胞。用磁铁将细胞吸至管底，上层液中含较纯的淋巴细胞。（（22））磁激活细胞分离术磁激活细胞分离术MACsMACs：：是一种特异性是一种特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。主要组成成分为主要组成成分为MACSMACS微珠、微珠、MACSMACS分选柱和分选柱和MACSMACS分选分选器器。。MACSMACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。化微粒。MACSMACS分选柱置于一个永久性磁场分选柱置于一个永久性磁场——MACSMACS分选分选器中，可以将磁力增强器中...