第六章第六章单克隆抗体的单克隆抗体的制备和应用制备和应用GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.本章内容本章内容第一节第一节单克隆抗体的概念和基本原理单克隆抗体的概念和基本原理第二节第二节单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.NielsK.JerneGeorgesJ.F.KöhlerCésarMilsteinGeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.克隆（Clone）又名无性繁殖系，指由一个祖先细胞经分化、增殖所产生的遗传性状完全相同的细胞群GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.多克隆抗体（Polyclonalantibody,pAb）用包含多种抗原决定基的抗原物质免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体的总和，称为多克隆抗体单克隆抗体（MonoclonalAntibody,mAb）由一个杂交瘤细胞克隆所产生的，针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点单特异性和均一性无限供应用混合的抗原制备出识别一个抗原决定簇的抗体GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.B淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理B细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.杂交细胞（hybridcell）在外界某些条件干预下（如PEG、电穿孔），当两个细胞紧密地接触的时候,其细胞膜可能发生融合，产生具有原来两个细胞染色体/基因的单个细胞，称为杂交细胞GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.杂交瘤细胞（Hybridomas）若用一种肿瘤细胞与另一种体细胞（如淋巴细胞）融合，所形成的杂交细胞称为杂交瘤细胞，简称杂交瘤。其既具有肿瘤细胞无限增殖的能力，也具有淋巴细胞的一些特性B淋巴细胞杂交瘤骨髓瘤细胞与免疫B细胞融合所产生的杂交瘤细胞GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.抗原制备免疫动物骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备细胞融合杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的筛选及克隆化单克隆抗体的鉴定单克隆抗体的制备第二节第二节单克隆抗体制备的主要步骤单克隆抗体制备的主要步骤GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.一、抗一、抗原细胞、细菌和病毒等，一般具有较强的免疫原性，可不加佐剂。例如，直接腹腔注射1~2×107个细胞。颗粒性抗原：可溶性抗原的来源主要是天然纯化，或者用目的基因在原核或真核细胞内表达。可溶性抗原需与弗氏完全或不完全佐剂混匀，进行免疫。可溶性抗原：GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.B淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，淋巴细胞在目的抗原刺激下增殖、分化，形成能分泌特异性抗体的形成能分泌特异性抗体的B淋巴细胞，有利于细淋巴细胞，有利于细胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次胞融合形成分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。多次免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使免疫可通过抗体亲和力成熟机制，使B细胞分泌细胞分泌高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高高亲和力抗体，由此形成的杂交瘤往往可分泌高亲和力抗体，有更高的应用价值。亲和力抗体，有更高的应用价值。二、免疫动物二、免疫动物免疫目的：GeneratedbyFoxitPDFCreator©FoxitSoftwarehttp://www.foxitsoftware.comForevaluationonly.采用与骨髓瘤供体同一品系的动物免疫动物品系（脾细胞供体）和骨髓瘤细胞在种系发生上距离越远则产生的杂交瘤越不...
