中国农业大学硕士学位论文酪氨酸蛋白磷酸酶在植物开花中的作用机理姓名：刘静申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：贾文锁20070601摘要开花在植物的生|炙周期过程中具有重要的作用和意义，植物的开花过程受到很多途径的调控。本研究筛选出了两个拟南芥早花突变体，命名为ptpl35、ptpl36。PTPl35彝IPTPl36编码酪氨酸蛋白磷酸酶。本文通过多种分子生物学技术和手段，对PTPl35和PTPl36调控开花的机理进行了研究。实验构建了PTPl35promoter：GUS和PTPl36promoter：GUS载体，采用沾花法转化野生型拟南芥，潮霉素抗性筛选出阳性株进行GUS染色；构建35s：PTPl35：GFP和35s：PTPl36：GFP载体，用基因枪法转化洋葱表皮细胞。结果显示PTPl35基因定位在维管束，叶肉细胞，花柱，花丝和花蒂，PTPl35编码蛋白定位在细胞质；PTPl36基因定位在维管束，花柱和花丝，PTPl36编码蛋白定位在细胞核和细胞膜。实验构建了PTPl36超表达载体，转入野生型拟南芥和p妒136：将构建的PTPl35和PTPl36超表达载体转入phyB，对T2代转基因植株进行基因表达分析和开花时间的表型观察。结果显示，转基因植株中基因的表达量明显高于未经转基因的对照，证明拟南芥转基因成功。对转基因植株进行表型观察，发现PTPl36在野生型中过量表达使植株表现为晚花，在ptpl36中的表达互补了突变体中的基因缺陷，植株比对照晚花，和野生型开花时间相一致；经过转化PTPl35和PTPl36的口hyB开花时间和对照没有显著差异。实验结果说明PTPl36是开花相关基因．而且是一个晚花基因。PTPl35和PTPl36与PhyB之间可能没有直接作用关系。在开花调控途径中CO是‘个特异基因，其下游的靶基冈是FT。实验对不同光照时间下的野生型、p护135、ptpl36和phyB进行CO和FT基因的表达分析，结果发现CO和FT在ptpl35、口tpl36中的表达时间延长，表达量增加。说明PTPl35和PTPl36可以在转录水平上调控CO和H、，P‘1"P135雨IP‘fPl36参与了植物开花凋控途径，而且作j{j位点在CO上游。为进一步研究PTPl35和PTPl36对CO在调控机理，实验还成功建立了野生型，ptpl35和ptpl36转CO基因的超表达体系，为深入研究PTPl35和PTPl36与CO的蛋白互作建立了平台。关键词：开花，酪氨酸蛋白磷酸酶IIAbstractPlantflowerplayscriticalrolesinthegrowthprocess，andthefloweringprocessisregulatedbymanypathways．RecentlyweidentifiedtwomutantsofA．rabidopsis，ptpl35andptpl36thatflowerearlierthanwildtyI)eandothermutants．PTPl35andPTPl36arePTPase．WeresearchedthemechanismofplantflowerregulatedbyPTPs．WeconstructedtheexpressvectorsPTPl35promoter：GUSandPTPl36promoter：GUS，andtransferredthesevectorsintoArabidopsisbyAgrobacterium．GnsstainingwasmanipulatedtotestwitchscreenedbyHygromycin，Westillconstruct35s：PTPl35：GFPand35s：PTPl36：GFPvectors，andtransferredthesevectorstoonionepidermalcellsbybiolistics．TheresultsshowedthatPTPl35-GUSactivitywashighinvascular,mesophyllcells，theconnectionofstyleandstigma，laxqueremadpedicle．PTPl36一GUSactivitywashighinvascular，laxquereandpedicle．PTPl35expressincytoplasmicandPTPl36expressinnuclearandcellmembrane．WeconstructedthevectorofPTPl36andletPTPl36overexpressedinwild-typeAmbidopsisandptpl36,andsodidPTPl35andPTPl36inphyB．Weanalysistheexpressoftransferredgeneandthefloweringtimeoftransgenicplants．TheresultsindicatedthattheexpressofPTPl36intransgenicplantswassignificantlyhi曲erthanCKandthetransgenicplantsfloweredlaterthanCK．ThismeansthatPTPl36takespartinthepathwayofplantflowerinduction．FloweringtimeofphyBtransferredPTPl35and盯P136wasnosignificantdifferencewithCK．It’sdemonstratedthatPTPl35andPTPl36witllPhyBmaynothaveadirectroleinrelations．COisaspecificgeneinthepathwayofplantflowerinducdon，anditsdownstreamgeneisFT．WeanalysistheexpressofCOandFTinwildtype，ptpl35，ptp]36andphyB’Fheresultsshowedthatin...
