实验2分离以尿素为氮源的微生物2VIP免费

实验2分离以尿素为氮源的微生物一.实验原理尿素NH3中性碱性酚红颜色：(酸性)黄色红色(变色范围pH6.4-8.2)二.实验目的使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶)通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应)三.实验步骤２.倒平板３.制备一定浓度梯度的细菌悬液１g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０-2稀释液，依次制备１０-3、１０-4、１０-5的土壤稀释液。４.稀释涂布分离法分离细菌１.制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基P26５.培养观察（倒置，37℃24-48h）（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）配制培养基•尿素培养基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g琼脂糖0.5g酚红0.25g尿素10ml•LB培养基蛋白胨：0.25g酵母提取液：0.12gNaCl：0.25g琼脂糖：0.5g对照组选择培养基实验组为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？接种•取0.1ml菌悬液涂布分离涂布分离37℃倒置培养按浓度捆成一摞恒温37℃培养1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基•因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂思考题：2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用•土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。•细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落•表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数。5.本实验分离出来的细菌一定都是以尿素为氮源的细菌吗？不一定，有些细菌能利用其它微生物的代谢产物。