实验1-大肠杆菌的培养与分离VIP免费

第一部分:微生物的应用实验目的:1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、基础知识：(一)微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．(二)细菌的常识1、结构2、分裂3、生殖4、变异类型5、在基因工程中的应用大肠杆菌细菌的外形与大小大肠杆菌属于杆状菌图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。自养菌:异养菌:腐生菌寄生菌大部分病原菌细菌的营养类型光能自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌细菌的革兰氏染色革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌☆培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。固体培养基和液体培养基、半固体培养基。1.培养基的类型(三)细菌的培养成分区别：琼脂2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、氧气、渗透压的要求．细菌喜荤，霉菌喜素大肠杆菌配方：酵母提取物0.25g蛋白胨0.5gNacl0.5g琼脂1g水:50ml4.培养基的用途液体培养基：扩增细菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。☆菌落液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长☆无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。（１）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：3.常用的消毒与灭菌的方法是指杀灭大部分病原微生物的方法。是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法消毒的方法：1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒……灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.1、灼烧灭菌灭菌的方法：2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。实验用具LB固体培养基大肠杆菌菌液（LB液体培养基）培养皿接种环酒精棉酒精灯镊子、火柴、记号笔配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录实验流程二、大肠杆菌的培养和分离实验操作（一）培养基的配置与灭菌取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基——细菌的扩大培养LB固体培养基——细菌的划线分离封口膜：既通气又不使菌进入（二）倒平板灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面注意事项：1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过...