霍乱弧菌实验室检测技术北京市海淀区疾病预防控制中心霍乱的流行情况霍乱的生物学性状样本的采集检验操作程序荧光定量PCR方法检测O1群、O139群霍乱弧菌及霍乱毒素提纲由O1群、O139群霍乱弧菌引起的霍乱以发病急、传播快、波及范围广、能引起大流行为特征，被世界卫生组织列为国境卫生检疫传染病，也是我国传染病防治法中规定强制管理的甲类传染病。O1群霍乱弧菌的流行情况1817年~1923年发生六次霍乱的世界大流行均由O1群霍乱弧菌古典生物型引起1820年古典生物型引起的霍乱首次传到我国1961年开始了第七次霍乱的世界大流行均由O1群霍乱弧菌埃尔托生物型引起（1905年发现）1961年埃尔托生物型霍乱首次传到我国O139群霍乱弧菌的流行情况1992年印度马德拉斯发生O139霍乱并迅速传播1993年6月我国新疆发现O139霍乱流行。1994年我市发现O139霍乱疫情O1群和O139群霍乱弧菌与其他霍乱弧菌的最大区别是能产生相同的霍乱毒素弧菌的分类形态与染色抗原结构、血清群生长与培养特性生化反应特性对外界的抵抗力药物敏感性霍乱的生物学性状弧菌的分类（包括5个属）弧菌属霍乱弧菌、副溶血弧菌、拟态弧菌、河弧菌等等气单胞菌属邻单胞菌属发光菌属水栖菌属霍乱的生物学性状形态与染色革兰氏染色阴性，两端钝圆或稍平单鞭毛、鱼群样排列，菌体弯曲呈弧形或逗点状暗视野显微镜下，霍乱弧菌运动活泼，呈穿梭状或流星状培养基上菌落略带灰色、半透明、扁平、稍隆起、光滑湿润霍乱的生物学性状革兰氏染色阴性，两端钝圆或稍平单鞭毛、鱼群样排列，菌体弯曲成弧形或逗点状抗原结构、血清群H抗原和O抗原根据O抗原不同，分为200多个血清型根据O抗原成分的不同分群特异性抗原因子和型特异性抗原因子O1群据型特异性抗原成分不同分为小川、稻叶、彦岛三个血清型小川型含A、B抗原因子，也含少量C因子成分稻叶型含A、C因子彦岛型含A、B、C因子霍乱的生物学性状生长与培养特性好氧同时兼性厌氧，最适生长温度37℃钠离子可刺激生长耐碱不耐酸初次分离时常用碱性蛋白胨水(pH8.8-9.0)增菌培养，霍乱弧菌经6～8h增菌后可在液体表面大量繁殖，形成菌膜霍乱的生物学性状生化反应特性两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖产酸不产气迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖氧化酶试验弧菌属细菌大多为阳性粘丝实验弧菌属细菌大多为阳性霍乱的生物学性状对外界的抵抗力在河、井、海水中可存活13周以上食物和海产品上存活7天左右对低温和碱耐受力强（在食品上的弧菌于冰箱保存（0~5度）比室温存活时间长）对热、干燥、太阳直射敏感对含氯制剂、碘制剂敏感对酸和强氧化剂极敏感煮沸100度1~2min即可被杀死药物敏感性细菌带有可传递的耐药质粒近年产生多重耐药株（丁胺卡那霉素、强力霉素、复方新诺明）诺氟沙星和环丙沙星对霍乱弧菌保持较高的敏感性霍乱的生物学性状霍乱的致病性主要毒素霍乱肠毒素CT小带联结毒素zot辅助霍乱肠毒素ace溶血素、溶细胞素、志贺样毒素O139群除具有上述O1群的致病物质外，还存在荚膜多糖和特殊LPS毒性决定簇，可抵抗血清中杀菌物质和黏附到小肠黏膜上。霍乱的生物学性状腹泻患者样本采集水样便采1~3ml，成形便取指甲大小量肛拭子：生理盐水浸湿采便管由肛门插入直肠内3~5cm处旋转取出呕吐物采1~3ml标本和碱胨水比例为1：5水样及液体标本采集采集相对静止表层水（30cm内）500ml其他液体标本采集500ml2~3小时内送检涂抹样本采集2~3支无菌棉签涂抹3~5只以上水生动物表面、腮部及泄殖腔2~3支无菌棉签涂抹食品或物品表面（地沟口，下水管口，水池壁涂抹，餐盘内外侧）直接放入10ml碱胨水送检样本的采集典型的米泔水样便动力试验水样便：取一滴在玻片上，盖盖玻片，暗视野显微镜直接观察成形便：取适量在生理盐水中研磨，盖盖玻片，镜下观察高度可疑样本：取增菌的碱胨水在玻片上，盖盖玻片，镜下观察镜下有穿梭样运动为动力试验阳性动力抑制试验取O1群、O139群霍乱弧菌诊断血清，取适...
