TNF2α对小鼠腹腔渗出细胞抗真菌活性的影响张天托周宇麒周凤丽毕筱刚张扣兴唐英春(中山大学附属第三医院,广州510630)中国图书分类号R503文献标识码A文章编号10002484X(2003)0520336203[摘要]目的:研究TNF2α对小鼠腹腔渗出细胞的激活和杀菌活性的效应。方法:以IL212、IL218、IFN2γ、TNF2α及抗体诱导小鼠腹腔渗出细胞和巨噬细胞,应用ELISA法测定细胞因子变化,Griess反应法测定培养上清液中NO的含量,检测巨噬细胞内新型隐球菌菌落数。结果:IL212和IL218联合应用协同诱导腹腔渗出细胞产生TNF2α,且能被IFN2γ抗体所抑制。IFN2γ、TNF2α协同诱导巨噬细胞产生NO和增强其杀伤新型隐球菌活性。结论:TNF2α在细胞因子相互调节诱导增强巨噬细胞杀真菌活性中起重要作用。[关键词]TNF2α;抗真菌活性;腹腔渗出细胞Effectsoftumornecrosisfactoralpha(TNF2α)onthefungicidalactivityofmouseperitonealexudatecellsZHANGTian2Tuo,ZHOUYu2Qi,ZHOUFeng2Lietal.The3rdAffiliatedHospital,SunYat2senUniversity,Guangzhou510630,China[Abstract]Objective:TostudytheeffectofTNF2αontheactivationandfungicidalactivityofmouseperitonealexudatecells.Meth2ods:ThemouseperitonealexudatecellsandmacrophagewerestimulatedwithIL212、IL218、IFN2γ、TNF2αormonoclonalantibody.Cytokinesandnitricoxide(NO)levelsinthemediumsupernatantweredeterminedwithELISAandGriessmethodrespectively.DetectedthenumbersofviableCryptococcusneoformansinmacrophage.Results:CombinedwithIL212andIL218synergisticallyinducedtheproductionofTNF2αbyperitonealexudatecellsandthiseffectcanbeinhibitedbyneutralizinganti2IFN2γmAb.CombinedwithIFN2γandTNF2αsynergisticallyin2ducedtheproductionofNObymacrophageandpotentiateitsactivityagainstCryptococcusneoformans.Conclusion:TheresultsuggeststhattheTNF2αplaysanimportantroleinenhancementofthefungicidalactivityofmacrophages.[Keywords]TNF2α;Fungicidalactivity;Peritonealexudatecells细胞因子参与体内多种病理生理过程,在调节抗感染免疫方面占有重要地位。有相当的病原体尤其是细胞内寄居的细菌、真菌、原虫在免疫功能低下时,难以控制。因此,利用细胞因子对增强机体非特异性抗感染能力具有重要意义。已证实白细胞介素12(IL212)、白细胞介素18(IL218)激活巨噬细胞,杀伤细胞内病原体,但它们与其它细胞因子相互调节、相互影响的关系尚未完全清楚1。我们使用IL212、IL218、γ2干扰素(IFN2γ)、肿瘤坏死因子2α(TNF2α)作用于小鼠腹腔渗出细胞(PEC),观察TNF2α在细胞因子网络中对小鼠腹腔细胞的激活效应和抗真菌活性的影响,进一步探索其作用机制,现将结果报道如下。1材料与方法111新型隐球菌准备取新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)临床株YC211,血清型A型,经PDA培养作者简介:张天托(1962年-),男,博士,副教授,主要从事感染免疫研究。基培养增菌生长2天后,生理盐水洗涤3次,经血球计数板计数,配制成悬液备用。112培养基和试剂RPMI1640培养基(GibcoBRL),小牛血清(FCS)(Whitakker),小鼠重组γ2干扰素(IFN2γ)(GenzymeDiagnostics),N222羟乙工哌嗪2N’222乙磺酸(Hepes)(BoehringerMannheim),重组小鼠白细胞介素12(mIL212)由Hoffman2LaRocheInc.惠赠,重组小鼠白细胞介素18(mIL218)由日本林原研究所惠赠,IFN2γ单克隆抗体(anti2IFN2γ)和TNF2α单克隆抗体(anti2TNF2α)由日本琉球大学部惠赠。113小鼠腹腔渗出细胞制备和分离用3%硫乙醇酸钠115ml注射于7～10周龄雌性(BalbΠC×DBAΠ2)F1小鼠腹腔,4天后取腹腔渗出液,用含10mmolΠLHepes溶液RPMI16405ml分2次冲洗腹腔,收集后用含10%小牛血清的RPMI1640配制成悬液,台盼蓝染色活性细胞大于90%,备用。取小鼠腹腔渗出细胞悬液(2×106ml-1)加入玻璃平皿,于5%CO2,37℃孵育2小时,用玻璃吸管吸取、洗涤溶液中非粘附细胞3次,收集备用。然后用·633·中国免疫学杂志2003年第19卷橡皮刷刷取,洗涤平皿3次,收集粘附细胞配成悬液。参照本作者已报道方法1,粘附细胞和非粘附细胞分别经流式细胞仪检测,作细胞类...
