第10卷第2期上海水产大学学报Vol.10,No.22001年6月JOURNALOFSHANGHAIFISHERIESUNIVERSITYJune,2001文章编号:1004-7271(2001)02-0158-05翡翠贻贝糖胺聚糖的制备及其生理活性初探收稿日期:2001202214资助项目:国家教委留学回国人员资助项目(1993-360)第一作者:洪鹏志(1966-),男,湖北黄梅人,硕士,讲师,主要从事水产品加工及综合利用方面的研究。Tel:0759-2382049,E2mail:hongpz@163.net洪鹏志1,章超桦1,吴红棉1,杨文鸽2,郝记明1,张静1(1.湛江海洋大学食品科学与工程系,广东湛江524025;2.宁波大学生命科学与生物工程学院,浙江宁波315211)摘要:探讨了翡翠贻贝中提取糖胺聚糖的蛋白酶水解及乙醇沉淀等条件。所制备的翡翠贻贝糖胺聚糖含GAG72.1%,经动物实验,当剂量为80mg/kg体重时,对昆明小鼠移植性肿瘤S-180的抑瘤率可达52.4%,且有增强免疫力的活性。关键词:翡翠贻贝;糖胺聚糖;蛋白酶水解法;提取;抗肿瘤活性中图分类号:S986.2;R931.74文献标识码:APrimaryexplorationforextractiongtechnologyandphysiologicalactivityofPernaviridisglycosaminoglycanHONGPeng2zhi1,ZHANGChao2hua1,WUHong2mian1,YANGWen2ge2,HAOJi2ming1,ZHANGJing1(1.DepartmentofFoodScienceandTechnology,ZhanjiangOceiversity,Zhanjiang524025,China;2.TheFacultyofLifeScienceandBiotechnologyUniversity,Ningbo315211,China)Abstract:Theextractionofglycosaminoglycan(GAG)fromPernaviridswasstudied.Theconditionsforproteinasehydrolysisandthedepositionwithethanolwereproposed.ThefindingsinantitumortestindicatedtheinhibitionrateonSarcoma180was52.4%whenthedosageofP.viridisglycosaminoglycanusedwas80mg/kg,andtheweightofspleen(immunityorgan)inmicewasobviouslyincreased.Keywords:Pernaviridis;glycosaminoglycan;proteinasehydrolizationmethod;Extration;antitumoractivity近十年来,动物中蛋白多糖的糖链部分糖胺聚糖(GAG),因具有抗凝血、抗肿瘤、降血脂、提高免疫力等多种活性[1],已引起国内外医药界的广泛关注。就国内而言,研究者从刺参[2]、海星[3]、鲨鱼[4]、扇贝[5]、马氏珠母贝[6]等海洋动物中提取后分离出各种糖胺聚糖,并对这些糖胺聚糖的理化性质、生理活性、药用价值进行了广泛研究,国外的研究者也对海参[7]、乌贼[8]、甲壳动物[9]中分离提取糖胺聚糖进行了研究报道。Cassaro[10]的研究结果表明,软体动物中含有多种糖胺聚糖。翡翠贻贝(Pernaviridis)别名青口螺,广泛分布于东海南部和南海,其繁殖能力很强,易于养殖。但由于缺乏市场及有效的加工手段,其资源未能得到充分的利用。本文探索从翡翠贻贝中提取糖胺聚糖的工艺条件,并对其抗肿瘤活性进行了初探,以期为翡翠贻贝的开发利用提供基础依据。1材料和方法1.1材料原料:翡翠贻贝购自湛江市霞山区民享市场,开壳后取其肉清洗后装袋冷冻备用。酶制剂:胃蛋白酶,酶活力1∶3000,上海生化制品厂;胰蛋白酶,酶活力1∶25,苏州东吴医用制品厂;枯草杆菌中性蛋白酶,酶活力1∶1000,无锡生达生物工程有限公司。其它材料及试剂:无水乙醇、乙酸钠、丙酮、氢氧化钠、盐酸、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝均为分析纯。昆明小鼠、S-180腹水瘤:广东医学院动物中心提供。1.2方法1.2.1分析测定方法水分,直接干燥法[11];灰分,高温灼热法[11];蛋白质,凯氏定氮法[11];脂肪,索氏抽提法[12];总糖,苯酚硫酸法[13];非蛋白氮,半微量凯氏定氮法[11];糖元,直接滴定法[11];阿尔辛蓝染色反应,Gold法[14];甲苯胺蓝染色反应,Pietrich法[15];GAG测定,Glod法[14]。1.2.2糖胺聚糖的提取翡翠贻贝肉→加4倍体积水用组织捣碎机匀浆→匀浆液→胃蛋白酶水解→胰蛋白酶水解→枯草杆菌中性蛋白酶水解→水解液→5000r/min,10min离心→清液→95%乙醇沉淀→5000r/min,15min离心收集沉淀→依次用无水乙醇和丙酮各洗涤三次→真空干燥→糖胺聚糖粗制品P1。1.2.3糖胺聚糖的纯化用吸附法[16]和透析法[10]。粗制品P1溶于蒸馏水中,配制成5%糖液,加1%(w/v)活性碳,不断搅拌吸附30min,硅藻土助滤,除去活性碳及其吸附的蛋白质、色素等杂质,得清液,用6mol/LHCl调pH至2.0,5000r/min离心除去沉淀,再用10%NaOH调pH7.0,...
